论文摘要
目的:本课题旨在利用转基因技术,构建活体的胰岛β细胞绿色荧光可示踪的斑马鱼系,从而为在此基础上进一步破坏胰岛β细胞,建立活体的胰岛β细胞可示踪的,可供高通量药物筛选的糖尿病胰岛β细胞破坏模型作出前期准备。方法:通过转基因技术,PCR技术、分子克隆等方法,建立GFP标记胰岛B细胞的遗传学转基因斑马鱼品系;活体呈像动态示踪胰岛B细胞的起源和成熟;全胚胎原位杂交和基因组PCR证实GFP阳性细胞与内源性胰岛B细胞共定位。结果:1.获得INS部分启动子的克隆和重组质粒INS:GFP,显微镜注射建立生殖系胰岛素转基因斑马鱼。2.通过生殖系转基因斑马鱼的筛选和荧光观察,24hpf GFP标记的胰腺β细胞群被探测到位于第二、三体节下方中线两侧的单一的椭圆形实体。随着斑马鱼胚胎的发育,胰腺逐渐增大并向右迁移,72hpf可以观察到胰腺β-细胞位于腹中线的右侧。卵黄囊消失后,120hpf明显看到胰腺右偏,同时下移到鱼鳔下方的十二指肠背侧。3.全基因组PCR证实GFP在基因组中的稳定整合,全胚胎原位杂交说明了活体转基因斑马鱼的GFP细胞为胰岛β-细胞。结论:1.利用转基因技术,构建了胰岛β细胞可示踪斑马鱼系。2.通过PCR和全胚胎原位杂交的方法证实所建立的胰岛β细胞可示踪斑马鱼系是完全成功的。3.本研究的成功为进一步建立可供高通量药物筛选的胰岛β细胞破坏斑马鱼疾病模型奠定了研究基础。
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