王亚群童克婷（安徽省妇幼保健院遗传室230001）
【摘要】目的研究羊水细胞染色体检查在临床产前诊断中的实用性和在染色体疾病诊断中的意义。方法对孕中期有穿刺指征的孕妇羊水细胞培养并进行染色体分析，检出异常核型及类型并统计。结果在成功培养的474例羊水中，检出异常核型22例，其中常染色体数目异常15例，性染色体数目异常1例，染色体结构异常6例，异常检出率为4.64%，染色体多态性核型22例。结论孕中期对染色体高危孕妇进行羊水染色体检查是产前诊断的重要手段。
【关键词】产前诊断羊水细胞染色体唐氏综合征
【中图分类号】R394【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）04-0017-02
据报道，我国每年染色体异常的新生儿约10万,活产婴儿中染色体异常约0.5%,唐氏综合征在新生儿中发病率最高,其次是性染色体异常[1],因此,对孕妇进行常规产前诊断,对优生优育具有重要意义。通过羊水细胞培养进行胎儿染色体核型分析，可对一系列的胎儿染色体异常疾病进行诊断。本次试验研究从2010年8月到2012年12月羊水细胞染色体检查的478例样本，现将结果报告如下。
资料与方法
一、对象
2010年8月至2012年12月在我院产前诊断门诊就诊，符合产前诊断羊水穿刺指征且无禁忌症的孕妇，签署知情同意书后进行产前羊水染色体诊断。孕妇平均年龄34岁(19～42岁),平均孕周20周(18～24周)行羊膜腔穿刺术，进行羊水细胞培养。
二、方法
1.取样:无菌条件下羊膜腔穿刺，B超引导，最初抽取的1～2ml羊水保留制成干滤纸片长期保存，随后抽取羊水20ml左右置两只15ml无菌离心管中。
2.接种:羊水标本以1800r/min离心10min后弃上清液，留0.5ml将沉淀制成一定浊度的细胞悬液，接种于3-4mlAmnioMAX－C100完全羊水培养基中，避免出现大量气泡，混匀后置于5%CO2，37℃培养。
3.收获:细胞培养6天换液后观察细胞生长情况，当培养瓶中有6～10个大的细胞克隆贴壁生长，且细胞克隆中有较多圆、折光性强的分裂细胞时，加秋水仙素后继续培养1h后进行收获。
4.制片:经过低渗、预固定、刮细胞（从培养瓶中转移到玻璃离心管中）、固定等步骤，将获得的沉淀制成胞悬液，冰片滴片，每瓶培养物分开制片编号，80℃烤片2h后G显带。
5.分析:每例标本选择形态适中、显带清楚、带数320条以上的核型分析至少5个，计数至少30个分裂组，遇异常或有疑问的标本则增加分析和计数的分裂相数。本实验室从实验到核型分析均分两组，由两人进行，两组分析478例羊水染色体结果均一致。
结果
一、羊水异常染色体核型检出结果
研究期间共采集478例羊水标本，成功培养474例，培养成功率为99.2%。在成功培养的474例羊水中，检出异常核型22例，其中常染色体数目异常15例，性染色体数目异常1例，染色体结构异常6例，异常检出率为4.64%。474例羊水细胞染色体核型中多态性变异22例，其中孕妇与男方做外周血染色体核型对照共21例，系女方遗传6例，男方遗传14例，其中一例inv（Y）其父检测Y正常来源不清。
二、羊水异常染色体核型分布
在22例异常染色体核型分析中，数目异常16例，包括21三体10例；18三体1例；47，XY，+mar1例；69，XXX1例（图1，2）；性染色体单体1例，核型为45，XO/46,XY；其他嵌合体1例。结构异常6例，包括易位、插入(见表1)；染色体多态性变异22例，包括D组和G组短臂随体增加(ps+/s+)，异染色质区增加(qh+)，倒位(inv)。
图1三倍体染色体（69，XXX）图
图2三倍体染色体（69，XXX）核型
表1不同产前诊断指征中羊水染色体异常情况
讨论
结果显示,染色体病高危胎儿检出异常的比率为4.64%,与文献报道的相近[2]。在本次实验中,孕妇血清筛查高风险进行羊水染色体检查共检出异常染色体10例,占总异常数的45.5%(10/22),其中21三体仅占5例,18三体1例，孕母血清筛查还发现其他染色体数目异常及结构异常（包括69，XXX；易位和性染色体异常，见表1），与已有报道符合[3]。
对35岁以上高龄孕妇是先进行孕母血清筛查,还是直接进行羊水穿刺检查一直存有争议[4]。在本实验中,单纯以高龄因素进行检查的有165例,共发现异常染色体核型7例,数目异常6例；高龄因素与血清筛查在染色体病检出率上无显著差别，与有关报道吻合[2]。
三倍体多为葡萄胎，但在本次实验中,发现一例69，XXX的病例，目前国内外均有报道[5]。为此加大计数并行羊水传代培养核型仍为69，XXX；另取胎儿父母双方血液标本和胎儿的羊水细胞一起送检行microDNA分析，经过15个标志物分析，证实胎儿多余的单倍体来源于母亲卵细胞在减数分裂是发生错误，不分离。
在超生异常的病例中有三例是胎儿颈部淋巴水囊瘤。淋巴水囊瘤是常见的胎儿淋巴系统异常，多见于颈部，在胎儿发育异常中较为常见，此类病例中约有60%-80%染色体核型异常，20%-40%染色体核型正常[7]，染色体核型异常者中Turner综合征最为多见，其次为21三体、18三体等染色体三体综合征，还有1q+，7q+的报道[8]。
本次试验三例胎儿颈部淋巴水囊瘤中2例羊水培养失败，原因均为细胞过少；一例结果为46，XN,10q+。
本次实验中易位携带父母胎儿的染色体异常率最高，达50%，除却自然选择，对染色体平衡易位的夫妇及时进行羊水染色体检查是防止染色体病患儿出生的重要手段。
2010年8月至2012年12月在我院产前诊断门诊就诊进行产前羊水染色体诊断的孕妇中不良产史的有30例，其中29例曾育有21三体患儿，1例曾育有18三体患儿，这是一个惊人的数字，如此多的缺陷儿给社会和家庭带来了巨大的经济和精神负担，所以普及产前诊断（产前筛查、超声诊断和羊水穿刺三者有效地结合）会有效地预防出生缺陷、降低出生缺陷率、提高出生人口素质和生命质量。由于羊水细胞培养过程较长,收获中期细胞的方法较为繁琐,需要2-4w的时间才能出诊断报告,所以它仍然需要我们细胞遗传工作者在这一方面去努力改进。
参考文献
[1]陆国辉.产前遗传病诊断[M].广东:科技出版社,1989:181.
[2]周玉春,王华,黄定梅,等.1034例羊水细胞染色体核型分析[J].中华围产医学杂志,2006,9:421-423.
[3]ShafferLG,BuiTH.Molecularcytogeneticandrapidaneuploidydetectionmethodsinprenataldiagnosis[J].AmJMedGenetCSeminMedGenet,2007,145(1):87-98.
[4]商敏,马彦彦.唐氏综合征血清筛查[J].中华围产医学杂志,2003,6(3):190-192.
[5]JauniauxE，BrownR，RodeckC，etal.Prenataldiagnosisoftriploidlyduringthesecondtrimesterofpregnancy［J］.ObstetGynecol,1996，88(6):983-989.
[6]GanapathyR，GuvenM，SethnaF，etal.Naturalhistoryandoutcomeofprenatallydiagnosedcystichygroma.PrenatDiagn，2004，24(12):965-968.
[7]凌晨，邓学东，刘一琳，等胎儿淋巴水囊瘤超声诊断联合染色体核型分析［J/CD］中华医学超声杂志:电子版，2011，8(4):838-842.