奥比沙星在鲫鱼体内药物动力学及残留研究

论文摘要

本文研究了动物专用药物—奥比沙星对水生生物常见致病菌的药效学。建立了奥比沙星在鲫鱼血浆和可食组织中反相高效液相色谱（RP-HPLC）检测方法和组织样品中奥比沙星的提取方法,进行了奥比沙星在鲫鱼体内的药物动力学及组织中的残留研究。研究结果报道如下:1、首次报道了奥比沙星对常见水生生物病原菌的体外抑菌效果。采用纸片法和二倍试管稀释法研究了动物专用药物奥比沙星对水生生物病原菌（大肠埃希菌、嗜水气单胞菌、产酸克雷伯菌、鱼害粘球菌、荧光假单胞、金葡球菌）的体外抗菌效果和最小抑菌浓度。结果:这几种水生生物病原菌对奥比沙星表现为中度和高度敏感。其中高敏菌有产酸克雷伯菌和金葡球菌,中敏菌有荧光假单胞、嗜水气单胞菌、鱼害粘球菌和大肠埃希菌。奥比沙星对产酸克雷伯菌和鱼害粘球菌具有较强的抑菌作用,最小抑菌浓度（MIC）均低于0.125μg/ml;对荧光假单胞菌和嗜水气单胞菌的MIC为0.5μg/ml,对金葡球菌最小抑菌浓度（MIC）为0.125μg/ml,对大肠埃希菌抑菌效果稍差,其MIC为4μg/ml。2、首次建立了奥比沙星反相高效液相色谱（RP-HPLC）检测方法。参考氟喹诺酮类药物的反相高效液相色谱（RP-HPLC）条件,根据奥比沙星的吸收光谱、化学结构、溶解性等理化性质,对流动相组成、流动相各组分的比例、流速、PH、柱温等因素进行筛选,建立了奥比沙星反相高效液相色谱检测方法:shim-pak·ODS-C18（4μm 4.6×150mm）不锈钢色谱柱,流动相为0.02%三氟乙酸:乙腈（75:25,V/V）,添加庚烷磺酸钠0.5g/L;磷酸调pH至2.5,流速0.8ml/min,柱温30℃,紫外检测波长279nm,保留时间10min,出峰时间约7.0min左右。最低检测限0.01μg/ml。3、首次建立了奥比沙星在组织样品中的提取方法。以回收率作为参考指标,比较纯溶剂提取法和酸碱溶剂提取法,确定采用纯溶剂提取,其回收率高,杂质分离完全。方法:取组织剪碎,匀浆,取均质样品,加入乙腈6ml,收集至离心管,振荡混匀,4000r/min离心5min,取上清液,加入6ml正己烷去脂,振荡后静置,分液漏斗取下清液水相,60℃水浴氮气吹干,残渣使用配置好的奥比沙星稀释液溶解。组织回收率在83.7%-99.12%之间。4、首次测定了鲫鱼单剂量肌肉注射奥比沙星10mg/kg b.w后在其体内的药物动力学。经房室模型分析,其血药浓度时间数据符合有吸收二室开放模型:C=6.093-0.773t+3.763-0.028t-9.856-1.286t。药动学特征为:吸收迅速,达峰时间（Tmax）较短（1.773h）,峰浓度（Cmax）较高（4.115μg/ml）,分布快(T1/2α为0.896h),消除较慢(T1/2β24.045h),药时曲线下面积（AUC）大（130.753（mg/L）/h）。5、探讨了奥比沙星在鲫鱼体内的消除规律,制定了休药期。奥比沙星组织渗透力强,分布广泛,在肝胰脏和肾中药物浓度最高。药物在肝胰脏、肾、肌肉和皮肤中的消除半衰期分别为:12.158、18.382、10.374和11.493h;消除较慢,因此在水生生物中使用必须制定严格的休药期。通过休药期软件WT1.4计算后得到各组织的休药期（WDT）,以10μg/kg为最低残留限量（MRL）,休药期不低于8d。研究表明奥比沙星对常见水生生物致病菌有较强的体外抑菌作用,在鲫鱼体内显示出吸收快,达峰时间短,分布快,消除较慢,有效浓度维持时间长,休药期短,残留量低的特点。经进一步扩大试验,可望作为鱼病防治的新药进行推广应用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1 研究目的和意义
• 2 氟喹诺酮类药物研究状况
• 3 氟喹诺酮类药物在水生生物中的应用
• 4 喹诺酮类药物在水生生物中药动学研究
• 5、奥比沙星的研究进展
• 5.1 奥比沙星的结构特点
• 5.2 药效学研究进展
• 5.3 使用情况和适用动物等等
• 5.4 药动学及残留研究进展
• 第二章 奥比沙星对水生生物病原菌的体外抑菌作用
• 1.材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 主要仪器
• 1.1.2 菌种与药物
• 1.1.3 试剂和培养基的配制
• 1.1.4 菌液制备
• 1.1.5 细菌计数
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 抑菌活性的测定
• 1.2.2 最小抑菌浓度（MIC）的测定
• 1.2.3 最低杀菌浓度（MBC）的测定
• 2 结果
• 2.1 体外抑菌作用
• 2.2 MIC和MBC结果
• 3 分析与讨论
• 3.1 奥比沙星对水生生物病原菌的抑菌活性
• 3.2 奥比沙星对水生生物病原菌的MIC和MBC
• 3.3 奥比沙星与其他喹诺酮类抗菌活性比较
• 4 结论
• 第三章 色谱条件优化
• 1.奥比沙星的HPLC检测方法筛选
• 1.1 氟喹诺酮药物的性质
• 1.2 色谱条件优化
• 2 组织中药物的提取方法和浓缩
• 第四章 药动学与残留研究
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 动物
• 1.1.2 药品
• 1.1.3 仪器设备
• 1.2 方法
• 1.2.1 常用试剂的配置
• 1.2.2 色谱条件的选择
• 1.2.3 给药及血样的采集
• 1.2.4 样品处理
• 1.3 最低检测限
• 1.4 标准曲线的绘制
• 1.5 精密度的测定
• 1.6 回收率测定
• 1.7 数据处理
• 1.7.1 血浆中药物经时过程及药动学参数
• 1.7.2 组织中药物的消除
• 1.7.3 休药期计算
• 2、试验结果与分析
• 2.1 色谱图
• 2.2 最低检测限
• 2.3 标准曲线
• 2.4 精密度
• 2.5 回收率
• 2.6 各时间点药物浓度与药时曲线
• 3.药物动力学特征
• 4.药物在各组织中的分布和消除
• 5 讨论分析
• 5.1 奥比沙星在鲫鱼体内的药动学特征
• 5.2 奥比沙星在不同动物之间的药动学特征比较
• 5.3 奥比沙星与同类药物之间的药动学特征比较
• 5.4 消除规律
• 5.4.1 最低残留限量（MRL）确定标准
• 5.4.2 休药期制定
• 参考文献
• 缩略表
• 致谢
• 作者简历