红花黄色素注射液对糖尿病肾病大鼠的保护作用以及对血管紧张素Ⅱ1型受体影响的实验研究

论文摘要

目的:本研究通过首先建立糖尿病(DM)动物模型,进而发展为糖尿病肾病(DN),应用红花黄色素注射液对模型进行干预性治疗,通过观察实验动物的24小时尿蛋白定量、糖化血红蛋白、血脂、肾功能、肾脏病理形态学变化以及肾组织中血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)的表达,研究红花黄色素对糖尿病肾病的治疗作用及其可能机制,为其临床应用提供实验基础和理论依据。方法:选用清洁级健康雄性SD大鼠46只,体重200±10g,普通饲料适应性喂养一周,代谢笼取尿检测尿糖和尿蛋白均为阴性,按体重随机分为正常组10只,模型组、贝那普利组、红花黄色素组各12只。除正常组外,其余各组大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ) 60 mg/kg,正常组注射相应量生理盐水,72小时后测血糖,以≥16.7mmol/L为DM模型成模标准。造模各组在DM模型成模后,按血糖水平重新分组,组别与动物数不变。治疗各组按成人剂量的20倍给药,每日一次。红花黄色素组给与红花黄色素注射液26.7mg/kg腹腔注射,贝那普利组给与贝那普利10mg/kg灌胃,正常组和模型组均腹腔注射相应量的生理盐水,各组共给药23周。于DM成模后第24周末禁食不禁水留取各组大鼠24小时尿液测定24小时尿蛋白定量;而后麻醉动物,取血检测各组大鼠糖化血红蛋白(HbA1C)、总胆取肾脏称重计算肥大指数,光镜、电镜下观察病理形态学变化,免疫组织化学法检测肾组织AT1R表达情况,并用计算机病理图像分析系统进行半定量分析。结果:1实验大鼠的一般状况正常组大鼠饮食正常,眼睛有神,反应敏捷,肌肉丰满,粪便呈麦粒状,尿量正常。其余3组注射STZ后,均出现明显的多饮、多食、多尿症状,并慢慢出现精神萎靡,反应迟钝,少动抱团。实验最后一周,与正常组相比,造模各组大鼠明显体型瘦小,肌肉偏少,上述症状以模型组最为显著。治疗期间造模各组均有大鼠死亡情况,其中模型组死亡3只,贝那普利组死亡1只,红花黄色素组死亡2只,死亡原因估计为高血糖引起代谢紊乱最终导致脏器衰竭。2各组大鼠体重、右肾重、肥大指数(肾重/体重)的比较模型组、贝那普利组、红花黄色素组大鼠体重比正常组明显偏轻(P<0.01),而三个造模组各组之间大鼠体重无显著性差异(P>0.05);正常组与造模各组大鼠右肾重无显著性差异(P>0.05);模型组、贝那普利组、红花黄色素组大鼠肥大指数与正常组相比明显偏高(P<0.01),而模型组与两个治疗组之间无显著性差异(P>0.05)。3各组大鼠24小时尿蛋白定量的比较24小时尿蛋白定量,模型组、贝那普利组、红花黄色素组与正常组比较均有显著升高(P<0.01),贝那普利组、红花黄色素组与模型组比较则明显偏低(P<0.01),而贝那普利组与红花黄色素组之间无显著区别(P>0.05)。4各组大鼠糖化血红蛋白(HbA1C)的比较模型组、贝那普利组、红花黄色素组各组大鼠糖化血红蛋白比正常组明显升高(P<0.01),而模型组、贝那普利组、红花黄色素组之间无显著性差异(P>0.05)。5各组大鼠血脂的比较造模各组血清总胆固醇(TC)明显高于正常组(P<0.01),红花黄色素组则比模型组明显偏低(P<0.01),而贝那普利组与模型组比较无明显差异(P>0.05);对于甘油三酯(TG),两个治疗组与正常组均低于模型组(P<0.01),而两个治疗组与正常组比较无显著性差异(P>0.05)。6各组大鼠肾功能的比较两个治疗组与正常组的血肌酐(Scr)明显低于模型组(P<0.01),贝那普利组则高于正常组(P<0.05),而红花黄色素组与正常组之间无显著性差异(P>0.05);对于尿素氮(BUN),两治疗组与正常组也均明显低于模型组(P<0.01),而与正常组比较,贝那普利组和红花黄色素组的BUN则明显升高(P<0.01),而两者之间的升高水平无显著性差异(P>0.05)。7肾脏病理形态学观察7.1光镜观察正常组肾小球结构完整,未见肾小球肥大,肾小球毛细血管基底膜、系膜、基质未见明显异常改变;模型组可见肾小球肥大,肾小球毛细血管基底膜增厚,肾小球系膜细胞增生、系膜基质增多,系膜区增宽;贝那普利组与红花黄色组也均有不同程度病理改变,但与模型组相比病变较轻。7.2电镜观察正常组肾小球基底膜结构清晰完整,毛细血管内皮细胞、足细胞未见异常;模型组肾小球基底膜显著增厚,大部分呈匀质样增厚,部分增厚呈丘状隆起,毛细血管内皮细胞重度融合,窗口大部分消失,足突广泛融合;贝那普利组和红花黄色素组也有类似病理变化,但程度明显较轻。8免疫组化观测结果AT1R在大鼠肾组织的表达主要位于肾小管内,以近端小管为主,远端小管也有表达,但表达较弱,肾血管周围也有表达,而在肾小球内基本无表达。在正常组、模型组和两个治疗组中均有表达。半定量分析结果显示,与正常组相比,模型组的表达要明显加强(P<0.01),而两个治疗组的表达也明显强于正常组(P<0.01);与模型组比较,贝那普利组和红花黄色素组的表达要显著降低(P<0.01),贝那普利组和红花黄色素组之间的比较则无明显差异(P>0.05)。结论:1红花黄色素注射液可以减少DN大鼠的尿蛋白;降低TC、TG,改善脂质代谢;降低Scr及BUN,保护肾功能。2红花黄色素注射液可以有效的抑制DN大鼠肾小球毛细血管基底膜的增厚、系膜基质的增生以及足细胞的融合,延缓肾脏病理的进展。3红花黄色素注射液可以抑制DN大鼠肾组织中AT1R的表达,提示红花黄色素对DN的治疗作用可能与阻断肾脏局部RAS的途径有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 红花黄色素注射液对糖尿病肾病大鼠的保护作用以及对血管紧张素Ⅱ1 型受体影响的实验研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 肾脏局部RAS与糖尿病肾病关系的研究进展
• 致谢
• 个人简历