鸡传染性喉气管炎病毒潜伏感染状态下相关基因表达水平的研究

论文摘要

本研究根据传染性喉气管炎病毒（Infectious Laryngotracheitis Virus,ILTV）SA2株ICP4基因序列设计并合成3对引物,以ILTV WG株DNA为模板扩增ICP4基因,并对其进行了序列测定。将ILTV WG株的ICP4基因及其推导的氨基酸序列分别与ILTV SA2株和其他疱疹病毒的ICP4基因及其推导的氨基酸序列比较后发现,ILTV毒株之间ICP4基因相对保守,核苷酸和氨基酸水平的同源性分别为99. 7%和99.1%,但与其他α-疱疹病毒的ICP4基因的同源性则较低。对潜伏感染鸡三叉神经节中病毒基因的检测显示,在人工感染ILTV WG株后第1060d内均能检测到ICP4特异RNA,而gB、gC、TK则未能检出。将20只4月龄SPF鸡人工感染ILTV WG株,于感染后第39d翅静脉和肌肉注射地塞米松（DEX）,感染后第5、9、10、11、12、39d及DEX处理后1、2、3、5、6、7、8d采喉拭子,检测病毒DNA,并于感染前和感染后第6、10、20、30d及DEX处理后第2、4、7、10、30d每组各取1只鸡采集三叉神经节,提总RNA后利用real-time RT-PCR的方法定量检测了ICP4、IFN-γ和IL-18特异性mRNA。结果表明,人工感染后处于潜伏状态的病毒能再激活,并且ICP4基因在病毒还未被激活时就能低水平表达,这种低水平的立即早期（IE）基因的表达能提供持续的抗原刺激来维持神经节中的炎性细胞分泌IFN-γ和IL-18,以至于维持病毒处于潜伏状态而不致激活后感染其他的健康宿主;DEX处理后的第2d,IFN-γ的表达达到峰值,对病毒的再激活起抑制作用,尽管DEX处理前后IL-18的表达量没有明显的变化,可以推测当潜伏的病毒一旦被激活时,IFN-γ协同IL-18起到抑制ILTV的作用。因此,本研究的结果可作为确定鸡群是否处于潜伏状态及各种疫苗是否能引起潜伏感染的一种方法,并且为进一步研究ICP4基因的功能、确定潜伏感染相关基因及潜伏感染时病毒抗原的持续表达与三叉神经节处的细胞免疫情况的相关性奠定了基础。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 综述一 鸡传染性喉气管炎及鸡传染性喉气管炎病毒
• 1 ILTV 的历史及分类地位
• 2 ILTV 的病原学特性
• 3 流行病学及病理变化
• 4 免疫生物学
• 5 诊断
• 6 防控
• 综述二 鸡传染性喉气管炎病毒的分子生物学研究进展
• 1 ILTV 基因组的结构
• 2 ILTV 的基因及其编码的主要蛋白
• 3 ILTV 的复制、蛋白质合成和形态发生
• 4 ILTV 潜伏感染和病毒被重新激活的机理
• 5 本研究的目的和意义
• 第二章 研究报告
• 试验一 鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）WG 株ICP4 基因的鉴定及其在潜伏位点的表达
• 1 试验材料
• 2 试验方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 试验二 实时荧光定量RT-PCR 检测ICP4、IFN-Γ和IL-18 基因在ILTV 感染鸡三叉神经节中的表达
• 1 试验材料
• 2 试验方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简历