论文摘要
目的:观察ox-LDL对体外培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC）LOX-1、TLR-4 mRNA的表达情况、NF-κB活化及迁移能力的影响,并将含有锌指蛋白A20基因的质粒转染平滑肌细胞进行干预,观察以上指标的变化,来探讨锌指蛋白A20对ox-LDL诱导的VSMC损伤保护作用的可能效应和机制。方法:体外培养Sprague-Dawley（SD）大鼠主动脉VSMC随机分成4组:A组（为空白对照组,培养液中不加任何干预因素培养48小时）;B组（ox-LDL组,普通培养基培养24小时,在培养基中加入50μg/ml的ox-LDL作用24小时）;C组（A20组,向VSMC转染含A20基因的质粒后培养48小时）;D组（ox-LDL+ A20组,先向VSMC转染含A20基因的质粒,培养24小时后在培养基中加入50μg/ml的ox-LDL作用24小时）;收集以上各组细胞,提取mRNA用RT-PCR的方法检测LOX-1、TLR-4 mRNA的表达;提取核蛋白用western blot的方法检测NF-κB核易位的量;进行Boyden小室迁移实验,观察各组平滑肌细胞的迁移能力。结果:ox-LDL（50μg/ml）刺激大鼠主动脉VSMC 24小时后LOX-1、TLR-4 mRNA的表达及NF-κB的活化均明显增加,[0]平滑肌细胞迁移能力也显著增强[0];转染含A20基因质粒的平滑肌细胞能完全抑制ox-LDL的以上作用,使TLR-4 mRNA的表达、平滑肌细胞迁移能力达到正常水平,甚至能使LOX-1 mRNA的表达及NF-κB的核易位的量降低到正常水平以下。结论:1. ox-LDL能明显激活平滑肌细胞NF-κB信号系统,并增强平滑肌细胞的迁移能力,可能由此激活动脉壁的炎症反应,诱导平滑肌迁移至内膜,触发动脉粥样硬化发生。2. ox-LDL能够刺激VSMC LOX-1、TLR-4 mRNA的表达增加及迁移能力的增强,而LOX-1、TLR-4作为跨膜信号转导受体而起作用,诱导动脉粥样硬化的发生发展,因此ox-LDL诱导平滑肌细胞LOX-1、TLR-4 mRNA表达上调进一步扩大了LOX-1、TLR-4对血管壁细胞的损伤效应[0],加速了动脉粥样硬化的进展。3.转染含有A20基因的质粒明显抑制了ox-LDL诱导的平滑肌细胞LOX-1、TLR-4 mRNA表达的增加及VSMC迁移能力的增强,重要的是可能由此阻断了ox-LDL引发的不断级联扩大的正反馈效应,充分阻止了动脉粥样硬化的发展;同时由于A20是通过抑制NF -κB信号而起作用,从另一方面证明了ox-LDL的效应至少部分是通过激活NF -κB信号而实现的。
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标签：氧化性低密度脂蛋白论文; 血管平滑肌细胞论文; 核转录因子论文; 锌指蛋白论文; 样受体论文;