论文摘要
背景和目的舌鳞癌（tongue squamous cell carcinoma TSCC）是口腔颌面部常见的恶性肿瘤，在口腔鳞状细胞癌中构成比最高，我国约占32.3％，欧美国家报道在21％～52％之间。近年来舌癌发病率呈快速上升趋势，已引起各国的注意。临床上由于肿瘤生长快、浸润性强，加之舌体有丰富的淋巴管和血液循环以及舌的运动频繁，常发生早期颈淋巴结转移，因此舌癌有较高的复发率、淋巴转移率，预后较差，被认为是一种临床生物学行为较恶劣的恶性肿瘤，术后常需配合化疗以提高疗效。但是传统化疗常因肿瘤细胞耐药或药物毒副作用大患者不能耐受而导致治疗失败，所以研究和开发新的抗癌药物，有效治疗舌鳞癌将是临床研究的一个重点。中药是我国传统医药，尤其近年来其在抗肿瘤方面的独特作用，成为国内外医药工作者关注的一个热点。姜黄素（curcumin）是中药姜黄的一种活性成分，具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、清除自由基、抗微生物以及对心血管系统、消化系统等多方面药理作用，尤其姜黄素的抗肿瘤作用日益引起人们重视，国内外众多学者对姜黄素的抗肿瘤作用及其机制做了大量研究，证实姜黄素具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡的确切作用，然而有关其抗头颈肿瘤研究却罕见报道。本研究用一定浓度的姜黄素作用人舌鳞癌细胞株Tca8113细胞，观察中药有效成分姜黄素对人舌鳞癌Tca8113细胞株增殖的抑制作用，初步探讨姜黄素对Tca8113细胞株抑制作用的可能相关机制，为临床研究提供新思路和借鉴。材料与方法人舌鳞癌细胞株Tca8113由上海交通大学口腔医学院提供，姜黄素由上海友思生物技术有限公司生产。将Tca8113细胞培养于普通的RPMI-1640培养基中，实验组用含有不同浓度姜黄素（5μmol／L，10μmol／L，20μmol／L，40μmol／L）的培养基进行培养，对照组细胞正常培养，至规定时间终止培养，进行各项指标检测。采用倒置显微镜观察细胞形态的变化，MTT法检测其生长抑制效应，流式细胞术分析细胞周期变化和细胞凋亡，定量分析Caspase-3表达的变化，免疫细胞化学染色观察Survivin、Ki-67、Bax等基因表达的变化，统计分析应用SPSS13.0软件，采用重复测量方差分析、χ2检验进行统计学处理，取α=0.05为显著性检验水准。结果（1）随着姜黄素浓度升高与作用时间的增加，其对细胞的生长、增殖抑制作用明显增强，在倒置显微镜下观察可见细胞生长增殖变慢、细胞形态变圆、变小，脱壁比细胞越来越多，漂浮在培养基中。MTT法检测结果显示姜黄素对细胞抑制效应有浓度、时间依赖性。（2）随着姜黄素浓度升高、作用时间的增加，细胞周期中G1期细胞比例逐渐增加，由46.20％上升到64.80％，S期细胞比例由53.10％下降到31.40％。不同浓度之间、不同时间之间对细胞G1期的阻滞作用有明显差异性（P＜0.05）。（3）随着姜黄素浓度升高、作用时间的增加，凋亡细胞比例逐渐增高，由1.80％上升到22.27％。不同浓度之间、不同时间之间对细胞凋亡率对改变有明显差异性（P＜0.05）。（4）姜黄素作用Tca8113细胞后，细胞中凋亡抑制基因Survivin与核增殖抗原Ki-67蛋白表达下降，与对照组相比Survivin在胞浆的着色减轻、Ki-67在胞核着色减轻，促凋亡基因Bax与促凋亡蛋白酶Caspase-3的表达明显增强，Bax在细胞浆着色增强，蛋白定量分析Caspase-3表达量增加。结论（1）姜黄素能明显抑制Tca8113细胞的生长、增殖，并有浓度、时间依赖性。（2）姜黄素能改变Tca8113细胞的周期分布，有明显G1期阻滞作用，并有量—效浓度、时—效关系。（3）姜黄素可使Tca8113细胞的凋亡率增加，并有量—效浓度、时—效关系。（4）姜黄素可下调Tca8113细胞中凋亡抑制基因Survivin、核增殖抗原Ki-67的表达，上调促凋亡基因Bax、促凋亡蛋白酶Caspase-3的表达。（5）细胞周期阻滞、凋亡抑制基因Survivin，核增殖抗原Ki-67表达的下降，促凋亡基因Bax和促凋亡蛋白酶Caspase-3表达的增强，可能是姜黄素对Tca8113细胞抑制作用的机制之一。