蝙蝠葛酚性碱对胰腺癌相关基因影响的研究

论文摘要

目的：通过蝙蝠葛酚性碱（PAMD）抗肿瘤活性的体内实验研究，观察PAMD对胰腺癌（BXPC-3）荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用及外周血TNF-α含量的影响；PAMD对胰腺癌（BXPC-3）荷瘤小鼠肿瘤组织中k-ras和DPC4基因及蛋白表达的影响；PAMD对胰腺癌（BXPC-3）细胞凋亡率的影响。方法：裸鼠40只，雌雄各半，采用右腋皮下接种胰腺癌（BXPC-3）肿瘤细胞，建立裸鼠胰腺癌动物模型，40只造模后小鼠随机分为五组，每组8只，分别为PAMD高剂量20mg／kg，PAMD中剂量10mg／kg，PAMD低剂量5mg／kg，阳性对照组给予注射用环磷酰胺1 5 6mg／kg，模型组给予同体积的生理盐水，另取8只作为空白组对照组（不接种瘤株，给予同体积的生理盐水）。观察PAMD对胰腺癌（BXPC-3）荷瘤小鼠移植瘤及免疫器官的影响，并按公式计算抑瘤率、脾脏指数；采用酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测BXPC-3荷瘤小鼠外周血TNF-α含量；采用荧光定量PCR（Real-time PCR）技术、蛋白印迹技术（Western-blot）检测肿瘤k-ras和DPC4基因及蛋白表达的差异；采用流式细胞术（FCM）检测胰腺癌（BXPC-3）细胞凋亡率，从而判断PAMD对在体肿瘤的抑制作用及相关靶基因（k-ras、DPC4）表达的影响，探讨PAMD抗胰腺癌作用靶点。结果：PAMD高、中、低剂量对BXPC-3荷瘤小鼠均有明显抑制肿瘤生长的作用，抑瘤率分别为34．91％、52．83％、41．51％，与模型对照组比较具有统计学意义（P＜0．0 1）；同时PAMD中、低剂量组荷瘤小鼠的脾脏指数与模型对照组比较，差异无统计学意义（P＞0．05），PAMD高剂量组荷瘤小鼠的脾脏指数与模型对照组比较，差异具有统计学意义（P＜0．05）；PAMD高、中、低剂量组、阳性对照组BXPC-3荷瘤小鼠外周血TNF-α含量较模型对照组明显升高，差异具有统计学意义（P＜0．01）；PAMD高、中、低剂量下调BXPC-3荷瘤小鼠瘤组织中K-ras mRNA及蛋白表达量，上调DPC4 mRNA及蛋白表达量，与模型对照组比较，差异具有统计学意义（P＜0．0 1）；PAMD高、中剂量组肿瘤细胞凋亡率明显升高，与模型对照组比较，差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论：PAMD对BXPC-3荷瘤小鼠具有明显的抑瘤作用，其抑瘤作用可能通过调节机体免疫功能，充分调动细胞因子生物学活性，下调K-ras基因mRNA及蛋白表达，上调DPC4基因表达，影响TGF-β信号传导通路，诱导细胞凋亡和分化，从而抑制肿瘤生长。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 文献综述
• 第一部分 蝙蝠葛酚性碱抗肿瘤活性的体内实验研究
• 材料与方法
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 结果
• 实验一 PAMD对胰腺癌小鼠一般状况及移植瘤的影响
• 实验二 PAMD对胰腺癌小鼠免疫器官的影响
• 实验三 PAMD对荷瘤小鼠外周血TNF-α含量的影响
• 第二部分 Real-time PCR检测胰腺癌相关基因表达的影响
• 材料与方法
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 结果
• 实验一 Real-time PCR检测胰腺癌K-ras mRNA表达结果
• 实验二 Real-time PCR检测胰腺癌DPC4 mRNA表达结果
• 第三部分 Western blotting检测胰腺癌相关蛋白表达的影响
• 材料与方法
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 结果
• 实验一 Western blot法检测K-ras蛋白表达结果
• 实验二 Western blot法检测DPC4蛋白表达结果
• 第四部分 流式细胞术检测BXPC-3荷瘤小鼠细胞凋亡率
• 材料与方法
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 攻读博士学位期间发表的论文
• 个人简历