慢性牙周炎患者中牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA毒力基因型的研究

论文摘要

背景与目的牙周炎是侵犯牙龈和牙周组织的慢性感染性疾病，是导致我国成人失牙的主要原因之一。大量研究表明牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis）是慢性牙周炎病变区最主要的优势菌，具有显著的毒力或致病性，能通过多种机制干扰宿主防御功能，引发牙周的破坏，且与牙周炎治疗后复发或病情加重有关。对该菌致病性的研究发现，它们具有一系列逃避宿主防御机制及破坏宿主组织的毒性因子，如：菌毛、外膜蛋白、细胞外囊泡、脂多糖和凝集素等。菌毛作为P．gingivalis表面结构之一，介导了该菌与宿主组织之间相互作用，促进细菌对靶位点的粘附和定植，并通过在病变部位抑制细胞外基质蛋白-粘附素受体来阻断上皮细胞和宿主免疫细胞之间的信息传导，从而抑制宿主的防御机制。另外，菌毛素多肽也可激活多形核白细胞（PMN），促进纤维蛋白原-PMN相互作用，使炎症前物质IL-8增加，IL-8为选择性诱导中性粒细胞和单核细胞趋化因子，而大量中性白细胞和单核细胞的聚集加重局部的炎症反应。FimA是特异的P．gingivalis菌毛亚单位蛋白基因，存在于P．gingivalis基因组DNA中，菌毛FimA基因编码的蛋白包括菌毛蛋白，粘附素蛋白和参与将亚单位菌毛素蛋白穿过细胞膜的转移蛋白。不同菌株产生的P．gingivalis菌毛FimA蛋白存在差异。本研究以河南慢性牙周炎患者作为研究对象，对患者龈下菌斑中P．gingivalis的感染情况及其FimA毒力基因型的分布与牙周炎发病的相关性进行研究，从基因水平探讨和分析P．gingivalis感染与牙周病发生的关系。方法参照Armitage牙周炎诊断标准，随机抽样选取2005年7月至2006年3月在河南省人民医院口腔科就诊的慢性牙周炎患者，共计52例作为研究对象。其中男性34例，年龄24～69岁，平均43.8岁。女性18例，年龄26～62岁，平均40.2岁。要求所有纳入研究的对象符合全身状况良好，无系统性疾病、遗传病史，近半年未接受牙周治疗，近三个月未服用任何抗菌药物。首先对52例研究病例进行临床观察指标的检查和记录；然后，收集52例慢性牙周炎患者的104个位点的龈下菌斑，采用UNIQ-100柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒法和Chelex-100法两种方法提取牙菌斑中细菌的DNA；采用16SrRNA PCR法检测P．gingivalis，并根据菌毛FimA毒力基因型的特异引物，用聚合酶链反应（PCR）检测FimAⅡ型和FimAⅣ型菌株的分布。结果牙龈卟啉单胞菌在52例慢性牙周炎患者龈下菌斑中检出40例，检出率为76.9％，在牙周袋深度（PPD）4～6mm位点龈下菌斑标本的P．gingivalis的检出率（57.6％）低于PPD＞6mm采样的位点（78.9％），两组差异有统计学意义（P＜0.05），表明慢性牙周炎患者龈下P．gingivalis感染率很高，支持该细菌在慢性牙周炎发病过程中具有重要作用，并且牙周袋深度（PPD）与P．gingivalis检出之间存在相关性。因此，选择中度或重度牙周袋最深处标本可获得较高的P．gingivalis阳性检出率。P．gingivalis毒力基因型FimAⅡ型和FimAⅣ型在40例慢性牙周炎P．gingivalis感染患者中，FimAⅡ型检出15例（37.5％），FimAⅣ型检出9例（22.5％），表明P．gingivalis FimA毒力基因型存在着基因多态性。试剂盒法和Chelex-100法提取细菌基因组DNA用于P．gingivalis的鉴定，两者之间没有显著性差异（P＞0.05），但后者操作更简单、快速、成本低，适于在普查时使用。结论1．慢性牙周炎患者龈下菌斑中，牙龈卟啉单胞菌的检出率76.9％，表明慢性牙周炎患者龈下P．gingivalis具有较高的感染率。牙周袋深度（PPD）与P．gingivalis检出之间存在相关性，选择中度或重度牙周袋最深处标本可获得较高的P．gingivalis阳性检出率。2．牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA毒力基因型存在着基因多态性。3．试剂盒法和Chelex-100法提取细菌基因组DNA用于牙龈卟啉单胞菌的鉴定，两者之间没有显著性差异，后者操作更简单、快速、成本低，适于在普查时使用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 1.研究对象
• 2.临床观察指标的检查和记录
• 3.龈下菌斑样本的采集和保存
• 4.试剂和设备
• 5.两种方法提取牙菌斑细菌DNA
• 6.聚合酶链反应PCR检测
• 7.统计学处理
• 8.质量控制与偏倚的防止
• 结果
• 1.受检牙牙周临床指标的检查情况
• 2.牙龈卟啉单胞菌检出及与牙周袋深度的关系
• 3.牙龈卟啉单胞菌毒力基因型FimAⅡ和FimAⅣ型的检出及比较
• 4.试剂盒法和Chelxe-100法提取细菌基因组DNA用于牙龈卟啉单胞菌的鉴定比较
• 讨论
• 1.牙龈卟啉单胞菌感染的检测
• 2.牙龈卟啉单胞菌毒力基因型FimAⅡ和FimAⅣ型分布
• 3.试剂盒法和Chelxe-100法提取细菌基因组DNA用于牙龈卟啉单胞 菌的鉴定比较
• 小结
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢