痹肿消汤干预胶原诱导性关节炎大鼠滑膜病变的蛋白质组学研究

论文摘要

目的： （1） 研究胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis, CIA）大鼠滑膜组织蛋白质表达，探讨类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis, RA）的发病机制； （2） 分析痹肿消汤（Bizhongxiao decoction, BZXD）干预胶原诱导性关节炎大鼠滑膜病变的差异蛋白质表达，探讨痹肿消汤治疗RA的作用机理。 方法： （1） 采用牛Ⅱ型胶原（bovine Ⅱ collgen，BⅡC）混合完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant, CFA）皮下注射大鼠复制实验性关节炎动物模型。模型成功后随机分为两组，一组为痹肿消汤组（n=30，简称治疗组），灌服BZXD，另一组为CIA模型组（n=30，简称模型组），灌服等剂量双蒸水。正常对照组（简称正常组，n=30）大鼠不作处理。 （2） 观察三组大鼠一般情况、关节炎指数积分、足爪肿胀度、病理形态学改变。在免疫后第10天、15天、20天、25天、30天、35天、40天、45天分别记录大鼠关节炎指数积分；每周测体重及足爪肿胀程度；在免疫后第25天、35天、45天分批处死大鼠，用HE染色法观察各组踝关节病理形态学改变。 （3） 应用双向凝胶电泳技术（two-dimensional gel electrophoresis，2DE）分别分离正常组、模型组及治疗组大鼠不同时间膝关节滑膜总蛋白，胶体考染显色，Image Scan对胶体考染的2-DE胶扫描以获取电子图像，Pdquest7.2图像分析软件比较分析此三组不同时间双向凝胶电泳图谱并识别差异表达的蛋白质。应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术（matrix-assisted laser desorption／ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS）得到相应的肽质量指纹图谱（peptide mass fingerprint, PMF），然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点，运用western blotting方法验证差异表达蛋白。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 目录
• 英语缩写词表
• 前言
• 技术路线
• 第一章 CIA大鼠模型的制备
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 统计学处理
• 2 结果
• 2.1 一般情况观察
• 2.2 各组大鼠体重变化情况
• 2.3 关节炎指数积分情况
• 2.4 足爪肿胀度测量
• 2.5 病理组织学观察
• 3 讨论
• 第二章 CIA大鼠滑膜病变及BZXD干预作用的蛋白质组学研究
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 统计学处理
• 2 结果
• 2.1 滑膜组织总蛋白质浓度测定
• 2.2 各组大鼠滑膜组织双向凝胶电泳图谱建立及图像分析
• 2.3 差异蛋白质点的MALDI-TOF-MS肽质量指纹图分析
• 2.4 蛋白质的功能分类
• 附表 正常组、模型组与治疗组滑膜组织鉴定的差异表达蛋白信息
• 3 讨论
• 3.1 CIA模型大鼠滑膜组织总蛋白质双向电泳条件的建立和优化
• 3.2 差异蛋白质的质谱分析
• 3.3 差异蛋白质与类风湿关节炎的关系及痹肿消汤干预的影响
• 3.4 痹肿消汤治疗类风湿关节炎的中医理论基础
• 第三章 差异蛋白质结果验证
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 统计学处理
• 2 结果
• 2.1 各组大鼠滑膜组织annexin V表达及痹肿消汤的影响
• 2.2 各组大鼠滑膜组织adolase A表达及痹肿消汤的影响
• 3 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述一 蛋白质组学技术的研究进展
• 综述二 蛋白质组学在类风湿关节炎研究中的应用
• 致谢
• 攻读学位期间的主要研究成果