瓜蒌子的化学成分和定性定量研究

论文题目: 瓜蒌子的化学成分和定性定量研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 生药学

作者: 唐春风

导师: 齐云,巢志茂

关键词: 瓜蒌子,定性鉴别,定量测定,栝楼仁二醇,高效液相色谱法,羟基二氢栝楼仁二醇

文献来源: 中国协和医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 常用中药瓜蒌子为葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim.或双边栝楼Trichosanthes rosthornii Harms的干燥成熟种子。具润肺化痰,滑肠通便之功效。用于燥咳痰粘,肠燥便秘。现在药理研究表明,它具有扩张冠状动脉,增加冠脉流量,保护缺血心肌,抗炎,抗肿瘤和泻下等活性。瓜蒌子具有“富油性”的特征,所含脂肪油中含有甾醇、栝楼仁二醇等五环三萜和葫芦素类四环三萜。该种子还含有蛋白质和糖蛋白等化学成分。关于瓜蒌子化学成分研究的文献报道虽然已有一些,但还有必要作进一步的深入研究。从化学成分角度,运用特征性成分进行瓜蒌子的定性鉴别,目前尚未见研究报道。而对中药瓜蒌子进行专属性成分的定量研究、建立含量测定方法的研究,亦未见文献报道。为了完善瓜蒌子的研究,解决上述问题,我们进行了3个方面的研究,（1）对栝楼种子的不皂化部分进行了化学成分的提取、分离和纯化,通过质谱（MS）、紫外光谱（UV）、红外光谱（IR）和多种核磁共振（NMR）的解析,确定了1个新化合物和4个已知化合物;（2）明确了栝楼仁二醇为中药瓜蒌子的专属性化学成分,建立了以栝楼仁二醇为对照品的薄层色谱（TLC）鉴别技术;（3）建立了瓜蒌子中栝楼仁二醇的高效液相色谱（HPLC）的含量测定技术,对18个不同来源的、具有代表性的瓜蒌子样品进行了含量测定,确定了瓜蒌子样品中栝楼仁二醇的含量范围。栝楼（Trichosanthes kirilowii Maxim.）的干燥成熟种子1.00kg,粉碎成粗粉,直接以5%氢氧化钾甲醇溶液加热回流1小时,皂化反应完成后回收甲醇,得总皂化物。该反应产物以蒸馏水溶解,乙醚多次萃取。萃取所得的乙醚层,用蒸馏水返洗至中性后加入适量无水硫酸钠脱水过夜,滤过,回收乙醚得到不皂化物。该不皂化物的得率为1.425%。该不皂化物经多种色谱分离技术（硅胶柱色谱法、中性氧化铝柱色谱法、碱性氧化铝柱色谱法、制备性硅胶薄层色谱法、制备性ODS高效液相色谱分离法、溶剂溶解分离法）进行尝试性分离后,通过溶剂溶解分离和制备性ODS高效液相分离法相结合的方法,分离、纯化并得到了5个化合物。通过质谱（MS）、紫外光谱（UV）、红外光谱（IR）和核磁共振（NMR）的解析,以及已有化合物对照品的对照,确定了3个已知结构的五环三萜类化合物7-氧代二氢栝楼仁二醇（7-oxodihydrokarounidiol,化合物2）、异栝楼仁二醇（isokarounidiol,化合物3）、栝楼仁二醇（karounidiol,化合物4）和1个甾醇类化合物豆甾-7,22-二烯-3β-醇（stigmasta-7,22-dien-3β-ol,化合物5）。通过上述波谱解析,尤其是多种技术的核磁共振技术(1H,13C,1H-1H COSY,DEPT,HMQC,HMBC,NOESY)的解析,还确定了一个新的化合物,其结构为（3α,6α,13α,14β,20α）-3,6,29-三羟基-13-甲基-26-去甲齐墩果-8-烯[（3α,6α,13α,14β,20α）-3,6,29-trihydroxy-13-methyl-26-norolean-8-ene],我们将之命名为6-羟基二氢栝楼仁二醇（6-hydroxydihydrokarounidiol）（化合物1）。首次对异栝楼仁二醇的核磁共振数据进行了归属。我们统计了《中华人民共和国药典》2000年版一部和2002年英文版在“性状”项下注明有“富油性”、“油性”、“oily”或“slight oily”的中药,共计42种。我们共收集了38种样品,经相同条件下薄层色谱的展开和显色,结果表明,除了中药瓜萎子具有栝楼仁二醇对照品的斑点外,其它所有37个中药样品在与栝楼仁二醇相同Rf值的位置均不显示该斑点,再次明确了栝楼仁二醇对中药瓜蒌子具有专属性。我们建立了瓜蒌子的薄层色谱定性鉴别技术,并用该技术对全国有代表性的12个产地的瓜蒌子药材样品进行了薄层色谱的鉴别,证明了该方法的可行性。该鉴别方法为:取本品粉末1g,置150ml平底烧瓶中,加5%（w/v）氢氧化钾甲醇溶液20 ml,置水浴上加热回流3 h,滤过,滤液蒸干,残渣加水20 ml使溶解,水溶液用乙醚提取3次,每次10 ml,合并乙醚液,用水洗涤3次,置水浴上蒸干,残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解,作为供试品溶液。另取栝楼仁二醇对照品,加醋酸乙酯制成每ml含1 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法（中华人民共和国药典2000年版一部附录ⅥB）试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上,以石油醚（60-90℃）醋酸乙酯（2:1）为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%磷钼酸乙醇溶液,在105℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。对于瓜蒌子的定量研究,我们针对有效成分栝楼仁二醇具有239 nm紫外吸收的特征,采用具有紫外检测器的高效液相色谱（HPLC）仪,运用反相高效液相色谱柱（ODS）进行测定。通过多种测定条件的探索和各项技术指标的完善,我们建立了瓜萎子中栝楼仁二醇的高效液相含量测定方法。并用该方法对全国有代表性的18个产地和来源的瓜蒌子药材样品进行了栝楼仁二醇的含量测定,确定了瓜蒌子药材中栝楼仁二醇的含量范围为55.20 mg/100 g-86.24 mg/100 g。我们建议对瓜蒌子药材的定量标准为栝楼仁二醇(C30H48O2)的含量不得少于0.05%,理论塔板数不得少于2500。该高效液相色谱的含量测定技术为:色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,检测波长为239 nm,柱温40℃,甲醇-水（97:3,v/v）为流动相;供试品溶液的制备:瓜蒌子样品粉碎,过20目筛,取本品粉末10 g,精密称定,置150 ml平底烧瓶中,精密加入5%氢氧化钾甲醇溶液100 ml,称定重量,加热回流1小时,冷却至室温后以5%氢氧化钾甲醇溶液补足至反应前的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液50 ml,减压挥干,加水100 ml使溶解并全部移至分液漏斗中,用水饱和的醋酸乙酯提取4次（40 ml、30 ml、30 ml和30 ml）,合并醋酸乙酯液,用醋酸乙酯饱和的水提取3次,每次10 ml。醋酸乙酯层以无水硫酸钠15 g脱水过夜,滤过,取滤液,并以醋酸乙酯洗涤,合并醋酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至10 ml量瓶中,加入1 mol/L HCl溶液0.1 ml,加甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜（0.5μm）滤过,取续滤液,即得;对照品溶液的制备:精密称取栝楼仁二醇对照品适量,加甲醇制成每1 ml含栝楼仁二醇0.5 mg的溶液,即得;分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,按测定法进行测定。该高效液相色谱法对栝楼仁二醇的线性回归方程为Y=1622458116 X+50263,r=0.9999,线性范围1.07-5.33μg;栝楼仁二醇平均加样回收率为100.16%,RSD为1.91%（n=6）。该方法操作简便、准确、重现性好,可用于瓜蒌子中栝楼仁二醇的定量分析。我们建立的定性鉴别和定量测定方法尚未见文献报道,系首次对瓜蒌子进行的质量标准研究。

论文目录:

名词、名词缩写及定义

中文摘要

ABSTRACT

第一章瓜蒌子的研究进展

1.化学成分的研究进展

2.药理作用的研究进展

3.临床应用的研究进展

4.质量标准的研究进展

5.参考文献

本实验分离得到并鉴定的化学成分的结构式

第二章栝楼种子中化学成分的研究

前言

1.仪器与药品

2.不皂化部分的提取

3.化学成分的分离与纯化

4.结构解析

5.理化数据

6.小结与讨论

第三章瓜蒌子的定性鉴别研究

前言

1.仪器与试药

2.栝楼仁二醇专属性的考察

3.定性鉴别方法的建立

4.瓜蒌子药材的定性鉴别

5.小结与讨论

第四章瓜蒌子的定量测定研究

前言

1.仪器与试药

2.高效液相色谱方法的建立

2.1 线性关系和线性范围

2.2 取样量的考察

2.3 皂化产物提取方法的考察

2.4 皂化反应试剂浓度的考察

2.5 皂化时间的考察

2.6 不皂化物处理方法的考察

2.7 对照品反应前后的考察

2.8 重现性

2.9 加样回收率

2.10 检测限

3.瓜蒌子中栝楼仁二醇的含量测定

3.1 对照品溶液的制备

3.2 样品溶液的制备

3.3 含量测定

3.4 18个瓜蒌子样品中栝楼仁二醇的含量测定结果

4.小结与讨论

致谢

发布时间: 2009-06-04

瓜蒌子的化学成分和定性定量研究

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