磷脂在黄颡鱼仔稚鱼人工微粒饲料中应用及其作用机理的研究

论文摘要

磷脂是一种生物活性物质,具有独特的理化性质和营养价值,其应用前景十分广阔。虽然已有研究报道磷脂在水产动物幼体饲料中具有潜在的重要作用,但目前关于水产动物幼体需要磷脂的原因缺乏了解。本论文通过系统研究在黄颡鱼仔稚鱼人工饲料中添加磷脂对其生长、发育、存活、耐受力、脂类代谢、抗氧化功能及肠道和肝脏组织学结构的影响,从宏观和微观初步探讨仔稚鱼对磷脂需求的机理,为磷脂在仔稚鱼人工饲料中的应用开发提供参考。1黄颡鱼早期发育阶段受精卯和鱼体脂类及脂肪酸组成变化目的:研究黄颡鱼受精卵孵化期间和仔鱼发育阶段磷脂、脂肪含量和脂肪酸的组成变化规律。方法:采用常规化学分析方法和气相色谱法对黄颡鱼从鱼卵受精开始至仔鱼孵化后未投饵的7d内的脂类含量和脂肪酸组成进行测定。结果:受精卵在整个孵化期间脂肪含量有下降趋势,而磷脂含量在受精16h后略有增加。受精卵中不饱和脂肪酸含量大于饱和脂肪酸含量。受精卵在整个孵化期间各种脂肪酸含量无明显变化。仔鱼孵化后,鱼体总脂肪和磷脂含量急剧下降,总脂含量从0日龄的4.57%降低到7日龄的0.75%,磷脂含量则从1.32%下降到0.14%。进一步分析发现,0～5日龄,鱼体总脂肪含量的下降幅度明显大于磷脂。仔鱼在饥饿期间鱼体脂肪酸组成发生明显变化,单不饱和脂肪酸含量下降最为明显,尤其是C18:1。仔鱼在饥饿期间,脂肪酸按n-9＞n-6＞n-3顺序被先后利用,黄颡鱼仔鱼发育阶段主要以单不饱和脂肪酸作为能量代谢基质,而C20:4n6（AA）和C22:6n3（DHA）优先于C20:5n3（EPA）被保存下来。结论:磷脂是黄颡鱼仔稚鱼阶段代谢的重要能源,是仔稚鱼正常生长和发育所必需的重要营养素,仔稚鱼对磷脂的需求量很大。2人工饲料中添加磷脂对黄颡鱼仔稚鱼生长、存活及耐受力的影响目的:研究人工微粒饲料中添加不同水平磷脂对黄颡鱼仔稚鱼生长、存活及耐受力的影响。方法:通过生长试验,选取同批孵化的黄颡鱼仔鱼,随机分成5组,每组4个重复,每个重复10000尾鱼,其中四组饲喂人工饲料,另外一组饲喂轮虫,作为对照组,进行饲养试验,试验期21d。试验人工饲料均含94%的同一种基础饲料和6%脂肪源,脂肪源由不同添加水平的大豆磷脂（0%、2%、4%、6%）和鱼油、豆油（2:1）（6%、4%、2%、0%）构成。试验结束后,测定各试验组仔稚鱼生长性能、存活率及耐受力。结果:日粮磷脂含量显著影响黄颡鱼仔稚鱼生长（p＜0.05）。各组黄颡鱼的体重和全长随饲料中磷脂添加量的提高呈上升趋势,其中以添加6%磷脂的人工饲料组的仔稚鱼生长最佳,和轮虫组饲喂效果相当。14日龄和21日龄时,磷脂对黄颡鱼肥满度变化的影响均未达到显著水平（p＞0.05）。在本试验条件下饲喂人工饲料的黄颡鱼存活率都比较高,达到90%以上,除PL0组外,各组差异不显著。未添加磷脂组黄颡鱼的存活率低于其它各组且随着饲料中磷脂水平的增加有提高的趋势。7～14日龄PL6组和轮虫对照组黄颡鱼仔稚鱼的日增重、体长相对增长率、体重相对增长率、特定生长率显著高于其它试验组（p＜0.05）,而PL0组最低（p＜0.05）。14～21日龄各组日增重较7～14日龄高,仍以PL6组日增重最明显,而轮虫对照组此阶段日增重与7～14日龄期间相比却增长不多。14～21日龄阶段各组黄颡鱼体长相对增长率、体重相对增长率、特定生长率均比7～14日龄有所下降,尤其以轮虫对照组下降最为明显。但PL0组体重增长率和特定生长率却显著高于其它各组（p＜0.05）。从整个试验期来看,黄颡鱼的日增重、体长相对增长率、体重相对增长率、特定生长率均随饲料中磷脂水平的上升而提高。黄颡鱼仔稚鱼体重与体长的回归方程符合鱼类生长的一般模式。各组黄颡鱼仔稚鱼体重与体长关系式指数b在2.62～2.77之间。黄颡鱼仔稚鱼饲料系数随磷脂添加水平的增加呈下降趋势。磷脂对提高黄颡鱼仔稚鱼耐受力的影响效果不是很明显。结论:磷脂能有效促进黄颡鱼仔稚鱼生长,提高饲料效率,增加存活率。3人工饲料中添加磷脂对黄颡鱼仔稚鱼鱼体脂类和脂肪酸组成的影响目的:研究饲料中不同脂肪源及磷脂添加水平对黄颡鱼脂质代谢特别是脂肪酸相对含量的影响,进一步探讨磷脂促生长作用机理。方法:试验设计与第2部分相同,饲养结束后,测定各试验组黄颡鱼鱼体脂类成分及脂肪酸组成。结果:各组饲料在稳定性试验前后其脂肪酸组成并无明显增减变化。磷脂对人工饲料在水中的脂肪酸稳定性无显著影响。随饲料中磷脂添加量上升和日龄增长,黄颡鱼鱼体总脂肪含量有升高的趋势。PL4、PL6组鱼体脂肪含量显著高于PL0、PL2组（p＜0.05）。21日龄鱼体脂肪含量以PL6组最高,显著高于其它各组（p＜0.05）,其他两组间差异不显著（p＞0.05）。饲料中添加不同水平的磷脂对14日龄黄颡鱼鱼体磷脂含量有影响,14日龄时,PL4、PL6与轮虫对照组间鱼体磷脂含量差异不显著（p＞0.05）,均显著高于PL0组（p＜0.05）。21日龄各组间鱼体磷脂含量无显著性差异（p＞0.05）。21日龄与14日龄相比,PL0组鱼体磷脂含量增加幅度显著高于其他组（p＜0.05）。14日龄时,鱼体C18:2n6c、C18:3n6、C18:3n3、PUFA和n-6PUFA含量各组间有显著差异（p＜0.05）,且随磷脂添加水平增加而增加。PL6组EPA和DHA含量显著高于PL0组（p＜0.05）。鱼体的C18:0、SFA含量随磷脂添加而显著降低。21日龄时,鱼体的C18:2n6c、PUFA和n-6PUFA含量在添加磷脂组仍是显著升高（p＜0.05）,与此相反,C16:0、SFA含量降低。不同日龄鱼体脂肪酸组成比较,C18:2n6c、C18:3n3、EPA、DHA、PUFA和n-3PUFA含量有随日龄增长而呈上升的趋势,而C16:0、C20:4n6和SFA含量呈进一步降低的趋势。轮虫对照组鱼体脂肪酸组成与人工饲料各组比较,其C16:0、C18:0、EPA和SFA含量较高,C18:2n6c、DHA和PUFA含量相对较低,与轮虫中相应脂肪酸的含量存在着较明显的平行变化趋势。结论:饲料中添加磷脂,能够促进黄颡鱼仔稚鱼体内脂类沉积,改善饲料中的EFA的有效吸收与利用。4人工饲料中添加磷脂对黄颡鱼仔稚鱼抗氧化能力及ATP酶活性的影响目的:研究饲料中添加磷脂对黄颡鱼仔稚鱼抗氧化损伤能力及某些重要代谢酶的影响,以进一步探讨磷脂对仔稚鱼生长影响的机制。方法:试验设计与第2部分相同,饲养结束后,测定各试验组黄颡鱼鱼体中抗氧化酶活性及ATP酶活性。结果:随着饲料中磷脂水平的提高,黄颡鱼鱼体中的MDA含量逐渐下降,SOD、CAT和GST活性相应得到提高,GSH-PX活性也是以磷脂组显著高于未添加磷脂组（p＜0.05）,其中磷脂添加水平为4%时GSH-PX活性达到峰值,当磷脂添加水平达到6%时,GSH-PX活性不再提高。21日龄各组黄颡鱼鱼体中的SOD、CAT、GST、GSH-PX活性比14日龄时有所上升,而MDA含量进一步下降。添加适量磷脂可显著提高黄颡鱼Na+、K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性。14日龄和21目龄时,添加磷脂组黄颡鱼Na+K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性均显著高于未添加磷脂PL0组（p＜0.05）,其中以PL4组ATPase活性最高,而PL0组ATPase活性最低。不同日龄黄颡鱼ATPase活性比较,21日龄人工饲料各组鱼Na+K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性比14日龄略有下降。结论:磷脂能够维持黄颡鱼仔稚鱼细胞膜的完整性,降低自由基对生物膜的过氧化损伤,提高机体抗氧化系统的活力和ATP酶活性。5饲料中不同磷脂添加水平对黄颡鱼仔稚鱼前肠和肝脏组织学的影响目的:研究在实际配方的人工微粒饲料中添加商品大豆磷脂对黄颡鱼仔稚鱼消化肠道肝脏器官发育及脂肪消化吸收的影响,进一步从组织学消化生理角度揭示磷脂对仔稚鱼促生长作用机理。方法:试验设计与第2部分相同,分别于14日龄和21日龄取样,制作组织切片,用病理成像系统和光学显微镜进行观察分析。结果:14同龄时PL0组黄颡鱼稚鱼前肠出现明显脂质沉积,细胞浆内有大量脂肪泡,肝脏固有结构不清,肝细胞索结构紊乱,肝窦消失,肝细胞肿胀,细胞浆呈空泡状。随着饲料中油脂添加量减少、磷脂添加量的增加,黄颡鱼稚鱼前肠粘膜上皮细胞中脂滴积聚现象逐渐减轻,杯状细胞数目增多,肝细胞空泡化程度降低。当饲料中添加6%磷脂时,黄颡鱼前肠上皮细胞和肝脏形态较正常,和轮虫组类似。21日龄黄颡鱼肠道和肝脏脂肪沉积程度较14日龄降低,肠粘膜上皮空泡化现象减少或消失,杯状细胞数目明显增多,肝脏脂肪沉积减少。结论:磷脂能减少黄颡鱼仔稚鱼前肠和肝脏脂肪积累,增强脂肪转运,促进仔稚鱼消化系统在发育过程中向成熟模式转化。随黄颡鱼仔稚鱼日龄增长,鱼体自身合成磷脂能力增强,磷脂作用随年龄增加而减弱,黄颡鱼对磷脂的需要量也随之降低。

论文目录

摘要

ABSTRACT

缩略语表

文中涉及的鱼类和甲壳类名称拉英汉对照

第一章文献综述

1 引言

2 磷脂的研究进展

2.1 磷脂的结构与组成

2.2 磷脂来源

2.3 动物体内磷脂的合成与代谢

2.4 饲料中磷脂作用机理研究进展

2.5 影响饲料中磷脂作用的因素

2.6 水产动物对磷脂的需要量

3 黄颡鱼生物学特性及研究进展

3.1 黄颡鱼的生物学特性研究

3.2 黄颡鱼的营养与饲料研究进展

4 仔稚鱼营养生理及其人工饲料的研究

4.1 仔稚鱼的营养消化生理

4.2 仔稚鱼消化酶的变化规律

4.3 仔稚鱼的营养需求

4.4 仔稚鱼的人工饲料要求

第二章研究的主要目的意义及技术路线

1 研究的主要目的意义和内容

1.1 本研究的目的意义

1.2 研究目标、研究內容和要解决的关键问题

1.3 本研究的主要难点

2 研究方法及技术路线

2.1 研究方法

2.2 技术路线

第三章黄颡鱼早期发育阶段受精卵和鱼体脂类及脂肪酸组成变化

1 前言

2 材料和方法

2.1 受精卵和仔鱼

2.2 脂类及脂肪酸分析

2.3 数据处理

3 结果与分析

3.1 受精卵的脂类和脂肪酸组成

3.2 初孵仔鱼未投饵发育阶段存活率

3.3 初孵仔鱼的脂类和脂肪酸组成

4 讨论

第四章人工饲料中添加磷脂对黄颡鱼仔稚鱼生长、存活及耐受力的影响

1 前言

2 材料和方法

2.1 试验动物

2.2 养殖系统

2.3 试验饲料

2.4 饲养管理

2.5 样本采集

2.6 耐受力试验

2.7 饲料成分分析

2.8 测定指标计算公式

2.9 数据处理

3 结果与分析

3.1 人工饲料中添加磷脂对黄颡鱼仔稚鱼生长性能的影响

3.2 经济效益

3.3 人工饲料中添加磷脂对黄颡鱼仔稚鱼耐受力的影响

4 讨论

4.1 磷脂对黄颡鱼仔稚鱼生长性能的影响

4.2 经济效益分析

4.3 磷脂对黄颡鱼仔稚鱼耐受力的影响

5 结论

第五章人工饲料中添加磷脂对黄颡鱼仔稚鱼鱼体脂类和脂肪酸组成的影响

1 前言

2 材料和方法

2.1 试验动物

2.2 养殖系统

2.3 试验饲料

2.4 饲养管理

2.5 脂类及脂肪酸分析

2.6 数据处理

3 结果与分析

3.1 试验饲料和轮虫的脂肪酸组成

3.2 黄颡鱼鱼体的脂肪及磷脂含量

3.3 黄颡鱼鱼体的脂肪酸组成

4 讨论

4.1 磷脂对黄颡鱼鱼体的脂肪及磷脂含量的影响

4.2 磷脂对黄颡鱼鱼体的脂肪酸组成影响

第六章人工饲料中添加磷脂对黄颡鱼仔稚鱼抗氧化能力及ATP酶活性的影响

1 前言

2 材料和方法

2.1 试验动物和日粮

2.2 饲养管理

2.3 样品制备

2.4 检测指标及检测方法

2.5 试验主要仪器设备

2.6 数据处理

3 结果与分析

3.1 磷脂对黄颡鱼仔稚鱼抗氧化性能的影响

3.2 磷脂对黄颡鱼仔稚鱼ATP酶活性的影响

4 讨论

4.1 磷脂对黄颡鱼仔稚鱼抗氧化性能的影响

4.2 磷脂对黄颡鱼仔稚鱼ATP酶活性的影响

第七章饲料中不同磷脂添加水平对黄颡鱼仔稚鱼前肠和肝脏组织学的影响

1 前言

2 材料和方法

2.1 试验动物和日粮

2.2 组织学

2.3 试验所需仪器设备

2.4 数据处理

3 结果与分析

3.1 人工饲料中添加磷脂对黄颡鱼仔稚鱼前肠和肝脏组织结构的影响

4 讨论

4.1 磷脂对黄颡鱼仔稚鱼前肠组织结构的影响

4.2 磷脂对黄颡鱼仔稚鱼肝脏组织结构的影响

4.3 磷脂对不同日龄黄颡鱼仔稚鱼肠道和肝脏组织结构的影响

本研究的小结、创新点及尚待进一步研究的问题

参考文献

附录

致谢

磷脂在黄颡鱼仔稚鱼人工微粒饲料中应用及其作用机理的研究

论文摘要

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