南京地区2010～2011急性呼吸道感染患儿的病毒病原学研究

论文摘要

实验目的：对2010-2011南京地区急性呼吸道感染患儿的鼻咽抽吸物及咽拭子进行13种常见呼吸道感染相关病毒的检测,了解该地区儿童急性呼吸道感染相关病毒的分子流行病学特点；对湖南22例以高热、喘憋为主要症状,抗生素治疗无效的重症肺炎患儿进行病毒病原学检测,探讨其潜在的病因。研究对象及方法：1.收集2010年8月至2011年7月在南京儿童医院因急性呼吸道感染就诊的住院患儿鼻咽抽吸物（NPA）381份及门诊患儿咽拭子（NPS）263份,共644份。门诊患儿于就诊当天,住院患儿在住院当日或次日采集标本。2.采集的NPA及NPS保存在病毒运输液中（含200U/ml青霉素,200U/ml链霉素,200U/ml两性霉素B及0.125%BSA）,低温运送至中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所并冻存于-80℃低温冰箱。3.采用巢氏聚合酶链反应（nested-PCR）对腺病毒（ADV）、博卡病毒（HBoV）及副流感病毒1、2和4（PIV1、2、4）进行筛查,采用普通逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）对其余呼吸道病毒进行检测,其中包括呼吸道合胞病毒（RSV）,鼻病毒（HRV）,流感病毒A、B（IFVA-B）,副流感病毒3（PIV3）,人偏肺病毒（HMPV）,冠状病毒HKU1及NL63（HCoV-HKU1、HCoV-NL63）。4.对22份湖南特殊标本分别进行ADV, HBoV, RSV, HMPV, HRV, PIV1,PIV3,IFVA, IFVB,NL63和HKU1的分子检测,对其中2例ADV7阳性标本进行全基因组序列测定。结果：1.通过巢氏PCR对644份标本分别进行PIV1、PIV2、PIV4的筛查,分别检出PIV142份（42/644,6.52%）,PIV29份（9/644,1.40%）,PIV438份（38/644,5.90%）；PIV1和PIV2检出率明显高于同实验室南京地区一年及兰州地区四年检出率（均为0）。2.采用巢氏PCR对ADV进行筛查及hexon分型,644例标本中共检出ADV阳性扩增产物171份,检出率为26.55%。分型结果显示：3型120例（70.18%,120/171）,7型16例（9.36%,16/171）,1型12例（7.02%,12/171）,2型10例（5.85%,10/171）,5型6例（3.51%,6/171）,6型3例（1.75%,3/171）,57型3例（1.75%,3/171）,41型1例（0.58%,1/171）。ADV呈全年散发,其发病高峰主要在4-7月。以7岁以内儿童多见（96.49%）。171例ADV感染患儿中有99例（57.89%）存在混合感染,其中以RSV、HRV多见。3.本研究中病毒总检出率为75.62%（487/644）。RSV检出率最高,为27.17%（175/644）,其次分别为ADV26.55%（171/644）,HRV15.68%（101/644）,PIV313.51%（87/644）,HBoV6.68%（43/644）,PIV16.52%（42/644）,PIV45.90%（38/644）,HMPV4.97%（32/644）,IFVB2.95%（19/644）,NL631.86%（12/644）,PIV2及HKU1均为1.40%（9/644）,IFVA1.24%（8/644）。487例呼吸道病毒阳性患儿中,男童352例,女童135例,男女病毒检出率差异无统计学意义（χ2=3.595,P=0.058）。487例阳性患儿中,年龄最小为0.004月,最大为151月,中位年龄为9月,平均年龄为18.3月。3岁以下患儿病毒检出率（78.24%）高于3岁以上患儿（64.17%）,差异有统计学意义（χ2=10.496,P=0.001）。4.湖南22份特殊呼吸道标本中,19份检出ADV,其中3型1份,1型1份,余17份均为7型。其他病毒检出结果：RSV7份,PIV33份,HRV2份,HBoV4份,HKU11份,PIV12份,HMPV、IFVA、IFVB及NL63均未检出。对编号为h5和h6的2份只有ADV7型感染的标本进行全基因组序列测定,结果与Genbank中已知ADV7型全基因组序列比对及系统进化分析,与7型同源性为99%,亲缘性最近。结论：1.2010-2011年南京地区急性呼吸道感染患儿标本病毒检出率为75.62%,提示病毒病原是该地区呼吸道感染的主要致病病原,其中RSV, ADV和HRV是该年度儿童呼吸道感染中居前三位被检出的病毒病原。2.ADV的检出在本年度居第二位,其感染全年均有发生,本年度的优势流行株为3型,且检测到3株最近新发现的型别57型,提示我们要继续加强对该病毒的流行监测。3.与以往同实验室南京和兰州的研究结果相比,本研究首次运用巢氏PCR检出了PIV1,PIV2和PIV4,检出率分别为6.52%,1.40%和5.90%,表明PIV亦是儿童呼吸道感染中的重要病毒病原。4.腺病毒7型是导致湖南以高热、喘憋为主,经抗生素治疗无效的重症肺炎患儿的致病病原,全基因组序列的测定和分析表明其与JN860677、AY601634两株7型毒株的亲缘性最近。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一部分 2010～2011年度南京地区呼吸道感染病毒病原学检测及临床研究
• 1.1 研究对象、标本采集、材料及方法
• 1.1.1 研究对象
• 1.1.2 标本采集
• 1.1.3 实验材料
• 1.1.4 实验方法
• 1.1.5 病毒核酸检测
• 1.1.6 产物鉴定
• 1.1.7 统计学方法
• 1.2 结果
• 1.2.1 副流感病毒1、2、4型筛查结果
• 1.2.2 腺病毒筛查结果
• 1.2.3 南京地区2010～2011年度呼吸道感染患儿呼吸道病毒的筛查结果
• 1.3 讨论
• 1.4 结论
• 第二部分 腺病毒7型全基因组的扩增
• 2.1 22例湖南呼吸道特殊标本的病毒检测
• 2.1.1 研究对象、材料及方法
• 2.1.2 结果
• 2.2 腺病毒7型的全基因组测定
• 2.2.1 ADV阳性标本的病毒分离培养
• 2.2.2 研究对象
• 2.2.3 病毒DNA的提取
• 2.2.4 ADV7型全基因组序列测定
• 2.2.5 序列分析
• 2.3 讨论
• 2.4 结论
• 第三部分 研究展望
• 参考文献
• 在学期间的研究成果
• 致谢