TNBC和非TNBC CD44+CD24-ESA+表型的细胞亚群的研究

论文摘要

目的：进行原代和传代细胞培养,明确原代培养的乳腺癌细胞群中是否存在CD44+CD24-ESA+细胞亚群,测定并比较原代细胞和传代细胞CD44+CD24-ESA+细胞亚群的比例及两者差异。通过前者建立的实验方法和技术,探讨（CD44+CD24-ESA+）CD44+CD24-/low细胞亚群在TNBC和非TNBC中的表达差异,揭示CD44+CD24-/low-表型细胞亚群和TNBC淋巴结转移、复发、全身器官转移等临床病理特征及预后之间的关系。方法：1.收集2011.5-2011.10期间15例原发性乳腺癌手术后新鲜肿瘤组织标本,进行乳腺癌细胞的原代培养和1028系乳腺癌细胞的传代培养,应用流式细胞技术筛选原代培养和传代培养的乳腺癌CD44+CD24-ESA+细胞亚群。2.收集2011.5-2011.10期间相应临床分期TNBC病人和非TNBC病人手术后新鲜肿瘤组织标本各8例进行原代培养,应用流式细胞技术筛选并测定CD44+CD24-ESA+细胞亚群的比例,进行统计学分析。3.收集2005-2007年间的60例’TNBC病人的术后蜡块标本,同时随机选取60例同时期相应临床分期的非TNBC病人术后蜡块标本,应用免疫组化双染技术检测TNBC病人和非TNBC病人的术后标本,分析两组病人CD44+CD24-/low细胞亚群所占比例的差异,进行统计学分析。结果：1.成功培养出人类乳腺癌原代细胞,并筛选出原代培养乳腺癌细胞群中的CD44+CD24-ESA+细胞亚群,测定出CD44+CD24-ESA+细胞亚群在原代细胞和1028系传代细胞中的比例分别为（2.90±1.63）%和（6.32±0.25）%,差异有统计意义（t=5.034,P=0.000）。2.利用流式细胞技术成功的从原代培养的三阴组和非三阴组筛选出CD44+CD24-ESA+细胞亚群,其在三阴组和非三阴组所占的比例各自为（4.0±0.91）%,（1.6±0.71）%,差异有统计学意义（t=6.931,P=0.000）。3.应用免疫组化双染技术检测三阴组和非三阴组的术后蜡块标本,进行CD44、 CD24染色,CD44+CD24-/low细胞在三阴组和非三阴组的阳性表达率分别为60.0%,31.7%,差异有统计学意义（χ2=9.701,P=0.002）。4.统计结果证实,TNBC中,CD44+CD24-/low细胞阳性组的淋巴结转移率83.3%、复发率38.9%、转移率61.1%均高于CD44+CD24-/low细胞阴性组,分别为45.8%、4.2%、33.3%,差异有统计学意义（P<0.05）; CD44+CD24-/low细胞阳性组的5年生存率为50.0%,CD44+CD24-/low细胞阴性组的5年生存率为75.0%,两组间的差异有统计学意义（χ2=4.882,P=0.027）。结论：1.本实验成功从乳腺癌术后手术标本中培养出乳腺癌原代细胞,通过标记CD44+CD24-ESA+,可以应用流式细胞技术成功从乳腺癌原代细胞和1028系传代细胞中分选出CD44+CD24-ESA+细胞亚群,证实了原代乳腺癌细胞中CD44+CD24-ESA+细胞亚群的存在。统计分析证实,1028系传代细胞中CD44+CD24-ESA+细胞亚群比例要高于乳腺癌原代细胞。2.利用流式细胞技术成功的从原代培养的三阴组和非三阴组筛选出CD44+CD24-ESA+细胞亚群,统计分析证实CD44+CD24-ESA+细胞亚群在三阴组的比例要高于非三阴组。初步判断TNBC较差的预后可能和较高比例CD44+CD24-ESA+细胞亚群有关。3.本实验通过免疫组化双染技术,对三阴组和非三阴组进行CD44、CD24染色,发现三阴组CD44+CD24-/low细胞阳性率明显高于非三阴组。4.最后的统计学结果证实,CD44+CD24-/low细胞亚群与TNBC的淋巴结转移、复发、全身器官转移相关。进一步证实TNBC较差的预后和其含有较高比例的CD44+CD24-/low细胞亚群密切相关。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语/符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• +CD24^-ESA⁺亚群在原代细胞和传代细胞中的研究'>一、CD44⁺CD24^-ESA⁺亚群在原代细胞和传代细胞中的研究
• 1.1 对象和方法
• 1.1.1 材料、试剂与仪器
• 1.1.2 技术路线
• 1.1.3 实验方法
• 1.2 结果
• 1.2.1 乳腺癌原代细胞的培养
• 1.2.2 乳腺癌传代细胞的培养
• +CD24^-ESA⁺亚群的比例'>1.2.3 乳腺癌原代细胞和1028系传代细胞CD44⁺CD24^-ESA⁺亚群的比例
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• +CD24^-/low亚群在三阴性和非三阴性乳腺癌中表达的研究'>二、CD44⁺CD24^-/low亚群在三阴性和非三阴性乳腺癌中表达的研究
• 2.1 对象和方法
• 2.1.1 材料、试剂与仪器
• 2.1.2 技术路线
• 2.1.3 实验方法
• 2.1.4 统计学方法
• 2.2 结果
• +CD24^-ESA⁺细胞亚群'>2.2.1 流式细胞分选三阴性和非三阴性乳腺癌CD44⁺CD24^-ESA⁺细胞亚群
• +CD24^-/low细胞百分比'>2.2.2 免疫组化双染三阴性和非三阴性乳腺癌CD44⁺CD24^-/low细胞百分比
• +CD24^-/low细胞比例与三阴性乳腺癌临床病理及预后的关系'>2.2.3 CD44⁺CD24^-/low细胞比例与三阴性乳腺癌临床病理及预后的关系
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 综述参考文献
• 致谢