复方黄芪制剂对小鼠免疫调节作用的血清药理学研究

论文摘要

复方黄芪制剂由黄芪、茯苓、鱼腥草、当归等中药组成，为了深入探讨其作用机理，我们进行了复方黄芪制剂对小鼠免疫调节作用的血清药理学研究。本实验首先研究复方黄芪制剂含药血清的制备和体外血清添加量，探讨复方黄芪制剂血清药理学的实验方法。其次通过复方黄芪制剂含药血清对小鼠T淋巴细胞增殖、IL-2活性时-效关系的研究，探讨复方黄芪制剂的药理作用及其免疫调节作用的部分机制。 本实验设立三个剂量组即低剂量组、中剂量和高剂量组，分别灌胃1d、3d和6d，用MTT法，观察不同的给药剂量、给药天数的含药血清对脾淋巴细胞增殖作用，确定最佳血清制备方案。结果表明，与空白组比较，灌胃1d的低剂量组、中剂量和高剂量组血清有促进T淋巴细胞增殖的作用，但无明显差异。给药3d，中、高剂量组都能极明显的促进脾淋巴细胞增殖转化（P＜0.01），但中剂量组的OD值比高剂量组的高，且差异极显著（P＜0.01）。灌胃6d的中剂量也有明显促进T淋巴细胞增殖（P＜0.01）。中剂量，给药6d与给药3d比较，差异极显著（P＜0.01）。由此说明最佳的给药剂量应该是中剂量即25g／kg体重，给药天数6d。 在确定最佳的血清制备方案后，我们探讨了体外实验系统中的血清添加量问题。本文设立空白血清组和试验血清组，血清添加量分别添加5％、10％、20％、40％、80％和100％，用MTT法，观察不同的血清添加量、不同孵育时间对脾淋巴细胞增殖作用，确定最佳血清添加量。结果表明，含复方黄芪制剂的血清与脾淋巴细胞共同孵育48h，在血清添加量20％与40％时有极明显的促进细胞增殖的作用（P＜0.01），当血清添加量达到100％的情况下，表现出一定的抑制细胞增殖的作用。而孵育72h，只有血清添加量20％有极明显的促进细胞增殖的作用（P＜0.01），血清添加量达80％时即出现明显的抑制细胞增殖的作用（P＜0.01）。由此说明最佳的血清添加量应该是20％或40％。 为了进一步探讨复方黄芪制剂的药理作用，我们应用中药血清学方法，观察其对小鼠免疫功能的影响。实验小鼠按25g／kg体重复方黄芪水煎剂灌胃，于给药后15min、30min、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、4h分别在无菌条件下取血，分离

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 实验研究
• 一、含药血清制备及添加量的优化选择研究
• 1 材料
• 1.1 中药材
• 1.2 实验动物
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 复方黄芪水煎剂制备
• 2.2 脾淋巴细胞悬液制备
• 2.3 不同剂量的复方黄芪制剂血清对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的研究
• 2.3.1 不同剂量的复方黄芪制剂血清的制备
• 2.3.1.1 动物分组及处理
• 2.3.1.2 血清的制备
• 2.3.2 淋巴细胞增殖活性测定
• 2.4 血清不同添加量对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
• 2.4.1 含药血清的制备
• 2.4.2 空白血清的制备
• 2.4.3 淋巴细胞增殖活性测定
• 2.5 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 不同剂量、给药天数的复方黄芪制剂血清对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的研究
• 3.2 血清不同添加量对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
• 3.2.1 空白血清组血清不同添加量对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
• 3.2.2 试验血清组血清不同孵育时间及不同添加量对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
• 4 小结
• 二 复方黄芪制剂血清对小鼠脾淋巴细胞增殖、IL-2活性的时-效研究
• 1 材料
• 2 方法
• 2.1 不同采血时间含药血清的制备
• 2.2 空白血清的制备
• 2.3 不同时相复方黄芪制剂试验血清对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的研究
• 2.3.1 淋巴细胞增殖活性测定
• 2.4 复方黄芪制剂试验血清对小鼠T细胞分泌IL-2活性的时—效关系研究
• 2.4.1 含药血清与空白血清制备
• 2.4.2 IL-2上清液制备
• 2.4.3 制备活化的脾淋巴细胞
• 2.4.4 IL-2活性检测
• 2.5 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 不同时相复方黄芪制剂试验血清对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
• 3.2 复方黄芪制剂试验血清对小鼠IL-2产生的促进作用
• 4 小结
• 分析与讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录一 综述
• 附录二 脾淋巴细胞照片
• 附录三 相关试剂配方
• 致谢