桂皮醛溶液对内氏放线菌的LTA诱导牙周膜成纤维细胞产生TNF-α影响的研究

论文摘要

牙周病是口腔常见病及多发病,其病因主要是由于一些细菌直接破坏牙周组织,同时这些细菌通过产生的毒素及自身的抗原诱导牙周组织局部的免疫活性细胞产生细胞因子,加重牙周炎症的发生。内氏放线菌是与牙周炎症相关的细菌,它可以诱导细胞产生大量的肿瘤坏死因子TNF-α,导致细胞坏死崩解,直接破坏牙周组织。桂皮醛是桂皮提取物,最近发现桂皮醛可以抑制一些细菌及IL-1β、TNF-α的产生。但它是否能抑制与牙周病相关的内氏放线菌的脂磷壁酸（LTA）诱导牙周膜成纤维细胞产生的TNF-a尚不清楚。目的：本实验拟观察桂皮醛能否抑制内氏放线菌的生长；测定桂皮醛对内氏放线菌的LTA刺激牙周膜成纤维细胞产生TNF-α的影响,看其能否抑制LTA诱导牙周膜成纤维细胞产生TNF-α。旨在研究桂皮醛在治疗牙周炎方面效果的研究,为寻找治疗牙周炎的药物方面提供理论及实验依据。方法：分别采用体外抑菌试验法和细胞培养法：1、内氏放线菌菌株ATCC12104配成5×103细胞/ml。将桂皮醛溶液和甲硝唑溶液分别稀释成1024、512、256、128、64、32、μg/ml的浓度；甲硝唑作为对照组,分别将不同浓度的桂皮醛及甲硝唑药液加入TSB液体培养基的内氏放线菌菌株中,二氧化碳条件下培养24小时后,显微镜涂片观察细菌的生长情况。2、体外培养牙周膜成纤维细胞,将传代培养的第四代用于实验。将培养好的内氏放线菌离心,将湿菌加入等体积的正丁醇萃取细胞壁成分,振荡离心,将沉淀物冷冻干燥。将冷冻后的白色粉末溶于色谱缓冲液,利用辛基琼脂糖凝胶CL-4B作为层析介质提取内氏放线菌的LTA。再用不同浓度的LTA（130.9、65.45、32.72、16.36、8.18mg/m1）与牙周膜成纤维细胞（密度5×103细胞/m1）共同培养,ELISA方法检测细胞培养上清液中的TNF-α的含量；再将桂皮醛配制256、128、64、32、16μg/ml浓度的药液,与LTA共同诱导牙周膜成纤维细胞,培养24小时后,用ELISA方法检测细胞培养上清液中的TNF-α的含量。结果：1、桂皮醛能明显抑制内氏放线菌的生长,最小抑菌浓度MIC均为64μg/ml。2、LTA能诱导牙周膜成纤维细胞产生TNF-α,以LTA浓度为16.36mg/ml时产生最多。3、桂皮醛能明显抑制内氏放线菌的LTA诱导牙周膜成纤维细胞产生TNF-α,而且随着桂皮醛浓度的增加,抑菌作用越强。结论：1、内氏放线菌的LTA能诱导牙周膜成纤维细胞产生TNF-α。2、桂皮醛对内氏放线菌的LTA诱导牙周膜成纤维细胞产生的TNF-α水平有抑制作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 实验一 桂皮醛溶液对内氏放线菌的体外抑菌试验
• 1 材料与方法
• 1.1 主要实验材料
• 1.2 培养基的配置
• 1.3 实验方法
• 2 结果
• 3 结论
• 实验二 桂皮醛溶液对内氏放线菌的LTA诱导牙周膜成纤维细胞产生1.8 TNF-α影响的研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 综述 脂磷壁酸（LTA）的研究进展
• 参考文献
• 综述 桂皮醛药理作用及应用于口腔领域展望
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介