柿子醇提取物的体外抗氧化研究

论文摘要

在机体内由于一些外源性因素和内源性的代谢过程,导致氧分子产生活性氧。在正常代谢过程中,活性氧的介入是有害的,活性氧引发细胞内外多种具有生物活性的化合物相互作用,最终导致机体产生病理变化。近年来,为了保护生物大分子免受活性氧攻击,抑制活性氧反应产物导致的对生物体的损伤,已开发和研究了许多天然抗氧化剂和合成抗氧化剂。合成抗氧化剂,如二丁基羟基甲苯（BHT）和二丁基羟基茴香醚（BHA）有较高的抗氧化活性。然而,合成抗氧化剂存有潜在的危害,因此,在食品化学领域发展安全的和有效的天然抗氧化剂成了一个重要的研究热点。依据在成熟期的涩度,柿子（Diospyros kaki）传统上分为涩柿和甜柿。水晶柿子因果肉在成熟期含有的可溶性单宁量很少,属于甜柿。柿子内含有许多生物活性成分,如多酚、黄酮、萜类化合物、甾醇类化合物、膳食纤维、类胡罗卜素和矿物质。本实验以火晶柿子（甜柿）为研究材料,用70%的乙醇制备甜柿醇提取物（extract of non-astringent persimmons,EP）。测定了EP活性成分中糖类、总酚和总黄酮的含量。以合成抗氧化剂BHT、Vc、D-甘露醇为阳性对照,采用总抗氧化力、还原力、脂质过氧化等不同分析方法,和清除羟基自由基、超氧阴离子、DPPH自由基活性的测定,对EP进行了体外抗氧化评价。同时,用Vc/Fe2+或H2O2/Fe2+诱导鼠肝线粒体损伤,检测了EP对线粒体脂质过氧化、线粒体肿胀度、线粒体内ATPase酶活力及蛋白质羰基水平的影响。实验结果表明:EP内含有62.03%的糖类、0.33%的多酚、0.725%的黄酮类物质;EP具有明显的总抗氧化活性和还原力,且呈现较好的量效关系;EP能有效抑制脂质过氧化和清除自由基能力,对DPPH·、·OH、O2?、及脂质过氧化的IC50依次为0.8 mg/mL、4.1 mg/mL、2.1 mg/mL、4.2 mg/mL。此外,由离体线粒体实验得出:EP对H2O2/Fe2+诱导线粒体脂质过氧化抑制作用的IC50为0.8 mg/mL;对Vc/Fe2+诱导的线粒体肿胀抑制作用明显,且有较好的量效关系;EP对H2O2/Fe2+诱导的ATPase酶活力下降保护效果明显,对蛋白质羰基水平具有很好地抑制作用。由此可见,EP具有显著的抗氧化活性,且能有效地保护线粒体的氧化损伤。柿子作为一种保健食品或抗氧化功能性食物,能够减缓生物体的氧化应激反应。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 柿子研究进展
• 1.1.1 柿子简介
• 1.1.2 柿子的活性成分研究
• 1.1.3 柿子的保健作用
• 1.1.4 柿子保健产品开发的进展
• 1.2 抗氧化作用的研究
• 1.2.1 自由基学说
• 1.2.2 自由基的产生及对机体生命活动的影响
• 1.2.3 合成抗氧化剂与常见的天然抗氧化剂（自由基清除剂）
• 1.2.4 线粒体抗氧化研究进展
• 1.3 本课题的选题依据及研究意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料、试剂
• 2.2 主要仪器设备
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 柿子有效活性成分的乙醇提取工艺流程
• 2.3.2 EP有效活性成分含量测定
• 2.3.3 EP有效活性成分的体外抗氧化研究
• 2.3.4 EP活性成分在体外对离体线粒体的抗氧化研究
• 2.4 统计学处理
• 3 结果与分析
• 3.1 EP提取物得率
• 3.2 EP活性成分的含量
• 3.2.1 总多酚的含量
• 3.2.2 总黄酮类的测定
• 3.2.3 总糖和多糖的测定
• 3.3 EP的体外抗氧化研究
• 3.3.1 清除DPPH自由基的作用
• 2^-·的作用'>3.3.2 清除超氧阴离子O₂^-·的作用
• 3.3.3 清除羟基自由基的作用
• 3.3.4 总抗氧化能力
• 3.3.5 还原力
• 3.3.6 脂质过氧化抑制率
• 3.4 EP对离体线粒体内抗氧化活性的研究
• 2O₂/FeSO₄系统诱导肝线粒体脂质过氧化的影响'>3.4.1 对H₂O₂/FeSO₄系统诱导肝线粒体脂质过氧化的影响
• 3.4.2 线粒体肿胀度
• 3.4.3 线粒体ATPase活力检测
• 3.4.4 线粒体蛋白质羰基水平检测
• 4 讨论
• 4.1 柿子活性成分提取方法及测定
• 4.2 EP在化学模拟体系抗氧化作用
• 4.3 EP在离体线粒体内的抗氧化作用
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间科研成果