论文摘要
第一章：氧诱导的视网膜病变模型鼠视网膜中蛋白激酶B（Akt）表达的动态变化目的：检测氧诱导的视网膜病变小鼠视网膜Akt和磷酸化Akt（pAkt）的蛋白及（Akt）mRNA表达,探讨其动态变化和意义。方法：出生后第7（P7）天的C57/BL6小鼠102只随机分为模型组（51只）正常组（51只）,模型组小鼠和母鼠一起放入氧气含量为（75%±2%）的饲养箱中饲养5天,第12天（P12）回到正常大气环境中饲养。正常组小鼠和母鼠一直置于正常大气环境中饲养。第17天取模型组和正常组各3只小鼠分别做FITC-Dextran造影视网膜铺片。分别提取模型组和正常组小鼠出生后在第7（P7）,9（P9）,11（P11）天3个时间点,和第12（P12）,14（P14）,16（P16）,17（P17）,23（P23）天5个时间点（每组每个时间点各3只小鼠）的视网膜总RNA及蛋白,用Western blot及RT-PCR技术检测视网膜组织中Akt表达的动态变化。结果：FITC-Dextran造影视网膜铺片示：与正常组小鼠视网膜比较,模型组小鼠可见到围绕着视乳头有大面积的无灌注区,血管高度不规则扩张,走形迂曲,有新生血管丛,并可见荧光渗漏。模型组鼠视网膜组织中的（Akt）mRNA在第7（P7）,9（P9）,11（P11）天灰度值分别为0.096±0.012、0.056±0.011、0.021±0.010（P＜0.05）,呈下降趋势；而在第12（P12）,14（P14）,16（P16）,17（P17）,23（P23）天灰度值分别为0.278±0.014、0.524±0.015、0.659±0.013、0.842±0.016、0.421±0.002（P＜0.05）,呈上升趋势,并在P17达到高峰。在正常组中（Akt）mRNA的表达无明显趋势（P＞0.05）。模型鼠视网膜组织中Akt蛋白质表达水平第7（P7）,9（P9）,11（P11）天灰度值分别为1.080±0.210、0.535±0.152、0.206±±0.124（P＜0.05）,呈下降趋势；而在第12（P12）,14（P14）,16（P16）,17（P17）,23（P23）天灰度值分别为0.249±0.110、0.481±0.152、0.704±0.240、0.978±0.270、0.491±0.161（P＜0.05）,呈上升趋势,并在P17达到高峰。在正常组中Akt蛋白质的表达无明显趋势（P＞0.05）。模型鼠视网膜组织中p-Akt蛋白质表达水平第7（P7）,9（P9）,11（P11）天灰度值分别为0.864±0.141、0.482±0.110、0.162±0.082（P＜0.05）,呈下降趋势；而在第12（P12）,14（P14）,16（P16）,17（P17）,23（P23）天灰度值分别为0.086±0.013、0.099±0.017、0.164±0.021、0.208±0.031、0.042±0.014（P＜0.05）,呈上升趋势,并在P17达到高峰。在正常组中p-Akt蛋白质的表达无明显趋势（P＞0.05）。结论：（Akt）mRNA及蛋白质表达水平在氧诱导视网膜病变小鼠视网膜中,高氧环境下明显下降,在缺氧环境下明显上调。第二章：外源性Akt抑制高氧环境下诱发的鼠视网膜血管丢失的研究目的：检测活性重组体Akt对高氧环境下视网膜血管丢失的抑制作用,探讨Akt信号通路对视网膜血管的保护作用。方法：在P6和P7天,C57/BL6小鼠8只通过腹腔注射戊巴比妥钠麻醉,并随机分为实验组和对照组各4只。实验组小鼠4只于玻璃体腔内注射1ul活性重组体Akt,对照组小鼠4只玻璃体腔内注射PBS。将两组小鼠共8只置于浓度为75%±2%高氧舱环境中生活。在P8天,FITC-dextran左心室造影视网膜铺片了解视网膜的无灌注区的改变。结果：实验组小鼠玻璃体腔内注射活性重组体Akt后,视网膜铺片结果显示无灌注区面积/全视网膜面积为32%,对照组玻璃体腔内注射PBS后无灌注区面积/全视网膜面积为13%。差异具有统计学意义（P＜0.01）。结论：高氧环境下运用外源性Akt矫正Akt的缺乏能够抑制视网膜血管的丢失,减少无灌注区。第三章：Akt抑制剂在低氧环境下抑制鼠视网膜新生血管形成的研究目的：观察Akt抑制剂（1L-6-hydroxymethyl-chiro-inositol2-（R）-2-O-methyl-3-Ooctadecylcarbonate）对低氧环境下视网膜新生血管形成的抑制作用,探讨Akt活性的抑制对于新生血管抑制的作用。方法：将鼠龄为7天的C56BL/6小鼠14只置于浓度为75%±2%高氧舱环境中生活5天,然后返回正常氧环境中。小鼠于出氧舱后当日被随机分为实验组和对照组各7只,实验组小鼠玻璃体腔内注射1.5ulAkt抑制剂,对照组小鼠玻璃体腔内注射1.5ulPBS。在P17天,实验组和对照组各取4只小鼠FITC-dextran左心室造影视网膜铺片了解视网膜的血管形态的改变。实验组及对照组各3只小鼠组织学切片观察突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量。结果：视网膜铺片结果显示实验组视网膜新生血管的面积/全视网膜面积为6%,对照组的视网膜新生血管的面积/全视网膜面积为14%,差异具有统计学意义（P＜0.01）。但两组的无灌注区无明显差异（实验组无灌注区面积/全视网膜面积为21%,对照组无灌注区面积/全视网膜面积为22%,P＞0.05）；组织学切片结果表明与对照组相比较,Akt抑制剂注射实验组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量明显减少,实验组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量为17个,对照组为51个。差异具有统计学意义（P＜0.01）。结论：在缺氧环境下运用Akt抑制剂能够抑制视网膜新生血管的发生但不减少无灌注区。
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标签：氧诱导视网膜病变论文; 视网膜新生血管论文; 活性重组体论文;