论文摘要
目的研究兔自体软骨细胞（Chondrocyte）复合自体“双相”骨基质明胶（Bone Matrix Gelatin，BMG）对膝关节软骨缺损的修复作用并与同种异体来源组织对比。方法1．取兔膝关节表面软骨，采用Ⅱ型胶原酶一次消化法，消化后体外单层培养，获得大量纯净的原代软骨细胞；2．体外传代扩增以获得足够数量的软骨细胞，对其形态学进行观察，绘制生长曲线；3．行免疫组化和Mallory染色、甲苯胺蓝染色以鉴定软骨细胞；4．取兔自体髂骨，按照Urist的方法稍作改进对髂骨进行脱脂、脱钙、去蛋白等处理后得到“双相”BMG，按需要修剪成一定大小和形状，灭菌后低温保存；5．将获得的软骨细胞接种于BMG上，构建细胞一载体复合物，体外培养三天后扫描电镜观察；6．制作兔膝关节软骨缺损模型，分为3组，实验组植入自体软骨细胞—载体复合物，实验对照组植入同种异体软骨细胞—载体复合物，空白对照组不植入任何材料。分别于第8周、第12周取材行大体观察、HE染色、免疫组化染色，并用Wakitani法进行组织学评分。结果1．关节软骨经Ⅱ型胶原酶消化7—8小时后离心去上清液，加入培养液进行原代软骨细胞培养，随换液可获得贴壁生长的软骨细胞，并能通过传代增殖获得大量软骨细胞；2．软骨细胞经免疫组化及Mallory染色、甲苯胺蓝染色呈阳性结果；3．BMG及细胞—载体复合物电镜观察可见BMG表面粗糙，多孔隙，孔隙大小为100um-800um，细胞在BMG表面及孔隙内壁均生长良好；4．第8、12周时实验组和实验对照组缺损为透明软骨样修复，空白对照组为纤维性修复。在同一时间点，实验组修复效果好于实验对照组，但Wakitani组织学评分结果显示：实验组与实验对照组无显著差异。但两组均优于空白对照组。各组第12周评分结果均优于第8周。结论自体软骨细胞复合自体BMG对关节软骨缺损有修复作用，修复效果好于同种异体软骨细胞复合自体BMG组，但差异无统计学意义，并且两组均优于不植入任何材料组。