论文摘要
强力霉素（Doxycycline, Dc）诱导肿瘤细胞凋亡及其在肿瘤动物模型中的治疗作用已有报道,其治疗作用主要是通过抑制细胞金属基质蛋白酶表达及细胞色素c氧化酶活力来抑制细胞转移、诱导细胞凋亡,但Dc诱导细胞凋亡的机制还不清楚。本章研究了线粒体,calpain和caspase在Dc诱导HeLa细胞凋亡过程中的作用。通过细胞形态学及DNA ladder分析证明Dc能够诱导HeLa细胞发生显著凋亡,并且这一过程具有药物浓度和时间依赖性。广泛性caspase（半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶）抑制剂（zVAD-fmk）及caspase-8,-9特异抑制剂（zIETD-fmk, zLEHD-fmk）抑制分析表明,Dc诱导的凋亡具有caspase活力依赖性。Western blot检测到caspase-3,-9,-8及calpain I（钙依赖蛋白酶I）发生了活化,但caspase-2活化没有被检测到。在胞浆蛋白中可以检测到从线粒体中释放的细胞色素c（Cyt c）和Smac,并且这两种蛋白的释放不能被zVAD-fmk和zIETD-fmk所抑制。进一步通过使用各种蛋白酶抑制剂,结合Western blot和细胞凋亡分析证明,caspase-9可能作为起始caspase通过线粒体途径活化,而caspase-8主要通过caspase-9和calpain途径活化。Caspase-8和-9的特异抑制剂对caspase-3的活化都有抑制作用,但前者抑制作用更强,这一结果与凋亡抑制分析结果一致。抑制caspase-8活力后检测细胞凋亡率及caspase-3活化,结果证明在Dc诱导的HeLa细胞凋亡过程中caspase-8起重要的作用。滑膜成纤维细胞是类风湿关节炎（RA）发病过程中一种重要的炎症细胞。在RA病人关节中滑膜成纤维细胞（SFB）发生增生,分泌多种炎症因子并且参与了诱导软骨细胞凋亡和关节损伤。Doxycycline具有抑制细胞增殖,抑制金属基质蛋白酶表达及诱导细胞凋亡的功能。本章研究了Doxycycline诱导大鼠RA模型中膝关节SFB（RA-SFB）细胞凋亡的功能。流式细胞检测表明Dc诱导的RA-SFB细胞凋亡具有药物浓度和处理时间依赖性;Dc可以诱导RA-SFB细胞发生显著的凋亡并且产生DNA Ladder。透射电镜下观察到Dc处理后线粒体发生明显的膨胀,线粒体嵴消失,胞质出现大量的空泡;线粒体膜电位（MMP）在Dc处理48 h内发生显著降低,所以线粒体参与了Dc诱导的RA-SFB细胞凋亡。Western blot分析证明caspase-3和calpain I在Dc诱导后发生活化;抗凋亡蛋白XIAP在Dc处理后部分被降解。本章研究为Doxycycline诱导RA中SFB细胞凋亡提供一定的依据,并且Doxycycline联合其它药物或基因通过凋亡的途径来治疗RA具有潜在的可能性。人羊膜上皮细胞（hAECs）具有胚胎干细胞及多能干细胞的特征,在一定条件下能够分化成不同组织的细胞,GDNF具有抗缺血后神经元凋亡的功能。本章中以慢病毒为载体,分别将GDNF和EGFP转染到hAECs中,得到稳定表达EGFP和GDNF的hAECs-EGFP和hAECs-GDNF细胞。分别将这两种细胞移植到脑中动脉阻塞（MCAO）缺血损伤的大鼠脑内。移植后第7天可以检测到GFAP（体外培养的hAECs表达的胶质细胞标志蛋白）的表达;移植后第21天仍可以检测到植入区EGFP的高表达;并且移植到体内以后,少部分hAECs可以被诱导表达神经元标志蛋白MAP2。两种细胞对脑缺血后大鼠行为学指标都有显著的改善作用,并且在移植后早期hAECs-GDNF治疗组比hAECs-EGFP治疗组恢复更明显。Western blot检测证明:在靠近hAECs移植部位的缺血区组织内,caspase-3活化基本被抑制。此外hAECs治疗后,缺血损伤区体积也明显减小。由于hAECs来源广泛,道德和伦理学问题较少,且免疫原性低,因此以hAECs为载体进行细胞基因治疗是一种潜在的、具有广阔应用前景的生物治疗方法。
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相关论文文献
- [1].Doxycycline抑制人肝癌细胞系HepG_2生长的实验研究[J]. 中国现代普通外科进展 2008(02)
- [2].Doxycycline诱导表达Msx2-GFP的鼠晶状体上皮Alpha-TN4细胞株的建立[J]. 中国医科大学学报 2019(06)
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