论文摘要
酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶（ACAT）是细胞内唯一催化游离胆固醇和脂肪酸合成胆固醇酯的酶,在细胞内胆固醇代谢平衡中起非常重要的作用。目前,在哺乳动物细胞中发现两种基因编码ACAT（ACAT1和ACAT2）。ACAT1几乎在各种组织细胞中均有表达,与细胞胆固醇代谢平衡直接相关;而在肝肠细胞中特异表达的ACAT2则与外源胆固醇的吸收和脂蛋白装配等密切相关。人类动脉粥样硬化、阿尔海默氏病、胆囊结石等一些重要病变,都与ACAT密切相关。因此,ACAT已成为分子筛药的重要靶蛋白。我们实验室与美国Chang TY教授实验室的合作研究,已首先报道了两种人ACAT基因的基因组结构和ACAT1基因的表达调控。在这些基础上,本论文进行两部分工作,第一部分重点围绕人ACAT2基因表达的可变性剪接和组织特异性进行研究,第二小部分是进行猴ACAT1 cDNA 5′-UTR的克隆分析。首先,进行可变性剪接成熟的人ACAT2 mRNAs及其编码的异构体酶活性的分析研究。人ACAT2基因长约18 kb,包含15个外显子,所有的外显子/内含子连接区序列均为经典的GT/AG序列。通过RT-PCR、克隆和DNA测序分析,获得三种人ACAT2 mRNAs。序列比较表明,它们是从同一pre-mRNA通过可变性剪接产生,外显子的缺失并未导致阅读框的改变;它们编码三种人ACAT2产物,即ACAT2a,包含所有的15个外显子,编码522个氨基酸;ACAT2b,包含除外显子4以外的14个外显子,编码502个氨基酸;ACAT2c,包含外显子1-3、6-7、11-15,编码379个氨基酸;其中ACAT2a与文献报道完全一致,ACAT2b与ACAT2c为新发现的2个ACAT2序列。利用克隆的三种大小不同的人ACAT2 ORF cDNAs构建相应的表达质粒,分别转染ACAT缺陷的AC29细胞进行表达研究,结果显示可表达出相应不同大小的ACAT2蛋白产物;同时在人肝肠细胞株中也检测到了同样不同大小的内源表达ACAT2蛋白产物。这些表明,可表达的内源性ACAT2b和ACAT2c蛋白可能是两种ACAT2异构体,而且它们的氨基
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