抗人红细胞膜抗原非凝集型单克隆抗体的研制及特性鉴定

论文摘要

抗人红细胞膜抗原非凝集型单克隆抗体(mAb)是与自身全血凝集试验相关的各类双特异性抗体分子的重要组成部分。以非凝集型单抗为基础的双特异性抗体分子可快速、准确地检测人体血液中感染病原体的抗原或抗体成分。本研究应用杂交瘤技术,将人O型红细胞膜免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,聚凝胺试管法筛选出识别红细胞表面共同抗原的抗体,玻片法剔除凝集型抗体(IgM、IgA),再将分泌非凝集型抗体(IgG)的杂交瘤细胞株有限稀释法克隆3次,对杂交瘤细胞的稳定性和mAb的特性进行鉴定。本研究获得1株可稳定分泌IgG1类mAb的杂交瘤细胞,命名为2E8。mAb2E8针对红细胞膜H抗原,没有血型交叉反应和种属交叉反应,细胞培养上清与人的A、B、AB和O型红细胞均能形成很强的凝集,凝集效价为1:1024,腹水凝集效价达到1:64×10~6。mAb2E8与红细胞结合后能诱导白细胞或激活补体,有效地破坏、溶解红细胞。此外,本研究建立了筛选针对红细胞表面抗原mAb的新方法—聚凝胺试验,为制备与红细胞相关的各种mAb的筛选提供一个简单快捷的途径。本研究通过杂交瘤技术,成功地制备了针对红细胞膜H抗原的非凝集性mAb,并对抗体的各项指标进行了较全面的鉴定。该mAb的凝集效价、相对亲和力及特异性均良好,且具有较强的体外生物学活性,为构建与自身全血凝集试验相关的双特异性抗体分子和单抗异聚体(HP)奠定了坚实的基础。

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前言

材料与方法

1.材料

2.红细胞膜抗原的制备

3.动物免疫

4.细胞融合

5.杂交瘤细胞的筛选与扩增

6.杂交瘤细胞的稳定性检测

7.杂交瘤细胞的染色体分析

8.单克隆抗体的制备

9.单克隆抗体的效价测定

9.1 细胞培养上清的抗体效价测定

9.2 腹水抗体的效价测定

9.3 吸收放散后抗体的效价测定

10.单克隆抗体的亚类鉴定

11.单克隆抗体的亲和力测定

12.单克隆抗体的特异性鉴定

12.1 mAb针对的血型抗原鉴定

12.2 mAb种属特异性鉴定

12.3 mAb与其它血型抗原的交叉反应性鉴定

12.4 mAb的大样本检测

13.单克隆抗体的体外生物学活性测定

13.1 mAb的ADCC作用研究

13.2 mAb的补体激活作用研究

结果

1.红细胞膜抗原的制备与鉴定

2.动物免疫与鼠血清抗体检测

3.细胞融合与融合率

4.杂交瘤细胞的筛选和扩增结果

5.杂交瘤细胞的稳定性检测结果

6.杂交瘤细胞的染色体测定结果

7.单克隆抗体的制备与效价测定结果

7.1 细胞培养上清的收集与抗体效价测定

7.2 腹水抗体的制备与效价检测

7.3 放散后抗体的效价测定

8.单克隆抗体的亚类鉴定结果

9.单克隆抗体的亲和力测定结果

10.单克隆抗体的特异性鉴定结果

10.1 mAb针对的血型抗原鉴定

10.2 mAb种属特异性鉴定

10.3 mAb与其它血型抗原的交叉反应性鉴定

10.4 mAb的大样本检测

11.单克隆抗体的体外生物学活性测定结果

11.1 mAb的ADCC作用效果

11.2 mAb的补体激活作用结果

讨论

结论

参考文献

致谢

综述

附录

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