论文摘要
目的：支气管哮喘是以支气管可逆性狭窄、慢性炎症和气道重塑的慢性肺气道性疾病。依赖于信号转导和转录激活因子6（STAT6）持续活化与过度表达,使T细胞向Th2分化和Th2的分泌IL-4等炎性介质,是哮喘分子基础。本研究通过STAT6圈套寡核苷酸（ODN）和哮喘小鼠脾淋巴细胞的共同培养来观察STAT6圈套寡核苷酸（ODN）对哮喘小鼠脾淋巴细胞的影响。方法：实验分组：将25只BLB-C雌性小鼠分成2组及实验小鼠脾淋巴细胞分成5组：Ⅰ组,正常小鼠5只；Ⅱ组,哮喘小鼠20只；空白组（A组）、哮喘组（B组）、哮喘圈套ODN组（C组）、哮喘无序ODN组（D组）、哮喘脂质体组（E组）。用卵白蛋白（OVA）和氢氧化铝建立哮喘模型。用淋巴细胞分离液分离脾淋巴细胞,进行体外培养并由阳离子脂质体2000转染剂携带合成的全链硫代修饰的STAT6寡核苷酸（ODN）导入细胞,后用OVA激发淋巴细胞使其激发活化。收集肺泡灌洗液分别行白细胞,嗜酸性粒细胞及淋巴细胞的分类计数；HE染色肺组织切片观察气道炎症变化。抽提RNA进行反转录IL-4mRNA,建立实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct进行基因表达的相对定量分析,同时采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定培养的脾淋巴细胞上清液中IL-4的浓度。结果：1.HE染色观察各组小鼠肺组织,哮喘小鼠组与正常小鼠组比较有明显炎症反应；2.哮喘组小鼠与正常小鼠比较,支气管肺泡灌洗液中白细胞,淋巴细胞,嗜酸性粒细胞均增高,有显著差异（P<0.01）；3.脾淋巴细胞IL-4mRNA的表达水平：（A组）空白组、（B组）哮喘鼠组、（C组）哮喘圈套ODN组、（D组）哮喘无序ODN组和（E组）哮喘脂质体组的淋巴细胞IL-4mRNA的△Ct（相对表达量）分别是：0.02545±0.00433、0.06742±0.00128、0.0315±0.00530、0.06504±0.00775、0.05952±0.00561。（A组）空白组和（C组）哮喘ODN组低于（B组）哮喘鼠组、（D组）哮喘无序ODN组和（E组）哮喘脂质体组（P<0.01）；（A组）哮喘ODN组和（C组）空白组间没有统计学意义（P>0.05）；（B组）哮喘鼠组和（D组）哮喘无序ODN组、（E组）哮喘脂质体组之间的差别没有统计学意义（P>0.05）；4.脾淋巴细胞上清中IL-4的分泌水平：（A组）空白组、（B组）哮喘组、（C组）哮喘ODN组、（D组）哮喘无序ODN组和（E组）哮喘脂质体组的淋巴细胞分泌IL-4分别是：10.34±3.45、22.45±5.43、12.32±6.36、17±8.35、19.65±9.35。（A组）空白组和（C组）哮喘ODN组低于（B组）哮喘鼠组、（D组）哮喘无序ODN组和（E组）哮喘脂质体组P<0.01)；（A组）空白组和（C组）哮喘ODN组间没有统计学意义（P>0.05）；（B组）哮喘鼠组和（D组）哮喘无序ODN组、（E组）哮喘脂质体组之间的差别没有统计学意义（P>0.05）。结论：用荧光显微镜观察脂质体2000转染FITC标记的STAT6圈套ODN能进入哮喘小鼠脾淋巴细胞；STAT6圈套ODN可特异性抑制哮喘小鼠脾淋巴细胞中IL-4mRNA和IL-4的转录和分泌；SC-ODN和脂质体对哮喘小鼠脾淋巴细胞的影响不具有差异性,说明STAT6圈套ODN对哮喘小鼠脾淋巴细胞的影响具有特异性而不是核酸和脂质体的作用。本实验为圈套技术治疗哮喘提供了新的思路。
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标签：圈套寡核苷酸论文; 支气管哮喘论文; 白介素论文; 信号转导和转录激活因子论文; 实时定量论文;