β-半乳糖苷酶在毕赤酵母中的高效表达及其在低乳糖奶生产中的应用

论文摘要

乳糖不耐受症,是影响牛乳及乳制品推广的一大因素。利用乳糖酶生产低乳糖乳及乳制品是解决乳糖不耐受症问题的最佳途径。然而,乳糖酶的生产却存在着单位产量低,胞内酶生产复杂,适应范围窄等问题。而基因工程技术的发展为乳糖酶提供了有效的途径。本论文对乳糖酶基因lacO进行了优化改造,设计并全序列合成了适合于在毕赤酵母中高效表达的基因lacM。将合成的基因克隆到酵母表达载体pPIC9上,得到表达重组子pPIC-lacM,将重组子转化到毕赤酵母中进行诱导表达。重组毕赤酵母中乳糖酶基因lacM的表达量达到原来的3～5倍,表达产物在pH5.8,温度55℃时其酶活性能维持在60%以上。金属离子和化学试剂对酶促反应影响不大。将不同酶量的乳糖酶分别添加到牛奶中在不同条件下进行实验,在3000U/ml酶量的条件下,60℃2h,乳糖水解率高达92%。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 乳糖缺乏及乳糖不耐受症
• 1.3 Β—半乳糖苷酶
• 1.4 巴斯德毕赤酵母
• 第二章 乳糖酶基因 LACM 的分子改造
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 结果与讨论
• 第三章 改造后的乳糖酶在毕赤酵母中的表达
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.3 实验结果
• 第四章 表达后的乳糖酶在牛奶中的应用
• 4.1 实验材料
• 4.2 实验方法
• 4.3 实验结果
• 结论
• 致谢
• 参考文献