论文摘要
由于DNA疫苗在诱导机体特异性细胞免疫方面具有独特优势,已作为针对慢性乙型肝炎具有潜力的免疫治疗手段被广泛研究。如何加强DNA疫苗的效果是推动DNA疫苗发展的关键。其中一个研究方向就是通过选择佐剂和调整免疫程序加强DNA疫苗的保护效率。异源性载体prime/boost免疫策略是利用不同性质的载体表达同一个保护抗原,一般是DNA疫苗初次免疫（prime）,然后用病毒载体加强（boost）。DNA疫苗抗原纯度高,持续表达低剂量的抗原,可多次重复免疫以及诱导高效价记忆性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应,是理想的用于初次免疫的疫苗;重组病毒能高效表达目的抗原,模拟病毒感染诱导机体免疫的天然过程,能诱发多种细胞因子,而且有利于高亲和性抗体和T细胞受体的选择,可以有效地产生Th1型和CTL反应。白细胞介素18（IL-18）最早被称为IFN-γ诱导因子γ,它不仅能促进T细胞和NK细胞产生IFN-γ、IL-2和GM-CSF等细胞因子,并能增强Th1细胞和NK细胞表达Fas配体,从而介导细胞毒作用。本课题在构建含HBV不同抗原基因的重组MVA假病毒颗粒的基础上,采取DNA prime/VLP boost的免疫程序,辅以细胞因子IL-18作为佐剂,评价其治疗HBV慢性感染的可能价值。首先将表达乙型肝炎病毒PreS2-S、C、PreC/C等抗原基因,以及分别突变2个和4个核苷酸的PreC/C基因分别克隆入与痘苗病毒Ankara株（MVA）基因组同源的穿梭载体pSC11中,构建并筛选重组质粒,将所得转染MVA病毒经过9次传代培养,筛选分别携带这些目的基因的重组MVA病毒,通过PCR扩增证实重组病毒分别正确携带目的基因,并且在传代过程中成功形成单克隆,间接免疫荧光鉴定重组病毒可以被所表达抗原的特异性抗体识别,证实重组病毒正确表达目的抗原并具有良好的抗原性。大量制备DNA疫苗、重组病毒以及鼠白细胞介素-18（mIL-18）质粒,分别采用DNA疫苗单独免疫、rMVA单独免疫、DNA prime/rMVA boost、DNA prime/rMVAboost+mIL-18的免疫程序免疫C57BL/6小鼠,采用ELISA、ELISPOT方法评价体液免疫和细胞免疫的效果。结果显示,表达PreS2-S、C两种抗原的各组疫苗在抗体产生的时间和滴度方面均没有统计学差异,用ELISPOT检测IFN-γ的产生可知,所有免疫组均可引起针对特异性抗原的细胞免疫,rMVA单独免疫组强于DNA疫苗单独免疫组,弱于DNA prime/rMVA boost和DNA prime/rMVAboost+mIL-18组,DNA prime/rMVA boost和DNA prime/rMVA boost+mIL-18之间没有显著差别。研究表明,携带HBV保护性抗原基因的重组MVA病毒可以诱导针对抗原的特异性细胞免疫和体液免疫,将其与表达相同抗原的DNA疫苗联合,采用DNAprime/rMVA boost的免疫方案,可以诱导比两者单独应用更强的细胞免疫反应,实验结果将为治疗型HBV疫苗的应用研究提供科学依据。
论文目录
相关论文文献
- [1].TACE序贯MVA治疗原发性肝癌的临床研究[J]. 当代医学 2020(04)
- [2].33 MVA全密闭矿热炉控温炉衬冶炼高碳锰铁生产实践[J]. 铁合金 2020(03)
- [3].杜仲幼果和叶片MVA途径基因表达差异分析[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版) 2016(05)
- [4].33 MVA工业硅电炉主风机采用汽轮机及电动发电机联合拖动技术[J]. 铁合金 2020(01)
- [5].25 MVA硅铁矿热炉带料开炉工艺的探讨[J]. 铁合金 2015(08)
- [6].16.5 MVA电炉喷料爆炸的探讨与增产降耗的实践[J]. 铁合金 2011(02)
- [7].杜仲成熟果实和幼果MVA途径基因表达差异分析[J]. 经济林研究 2013(04)
- [8].30 MVA高碳锰铁电炉的炉衬维护[J]. 铁合金 2017(08)
- [9].提高大肠杆菌通过MVA途径合成异戊二烯[J]. 生物工程学报 2015(07)
- [10].30 MVA电石炉电极软硬断事故原因分析及对策[J]. 中国氯碱 2013(11)
- [11].25.5 MVA钛渣电炉使用碳素电极可行性的探讨[J]. 钛工业进展 2009(01)
- [12].33 MVA硅钙合金大型电炉工程技术经济分析与评价[J]. 铁合金 2014(02)
- [13].25.5 MVA封闭炉高碳锰铁和富锰渣冶炼实践[J]. 铁合金 2013(02)
- [14].30 MVA硅钙炉的烟气净化和硅粉的回收利用[J]. 铁合金 2012(03)
- [15].25 MVA矿热炉功率自动调节控制的设计与实践[J]. 铁合金 2008(03)
- [16].MVA与试卷统计分析方法评价课程教学质量[J]. 经济师 2015(10)
- [17].用兆伏安(MVA)计算系统短路电流的探讨[J]. 山东煤炭科技 2010(03)
- [18].300 MVA短路试验变压器设计及绕组电动力分析[J]. 船电技术 2017(05)
- [19].MVA广视角来袭 AOC M2440V登场[J]. 电脑迷 2012(06)
- [20].EVA和MVA在企业绩效评价中的应用比较[J]. 经济研究导刊 2011(27)
- [21].72 MVA镍铁电炉大修[J]. 有色设备 2019(06)
- [22].360 MVA主变总烃超标原因分析与处理[J]. 湖北电力 2019(03)
- [23].MVA广视角来袭 AOC M2440Ve显示器上市[J]. 微电脑世界 2012(03)
- [24].不同标准差估计方法下的过程能力指数的置信区间的比较研究[J]. 应用概率统计 2009(02)
- [25].中、低压一体化无功自动补偿系统在25.5 MVA高碳锰铁电炉热料工艺中的应用[J]. 铁合金 2020(03)
- [26].40.5 MVA密闭电石炉生产优化的探讨[J]. 铁合金 2020(04)
- [27].75 MVA铬铁炉电极糊的应用研究[J]. 铁合金 2017(02)
- [28].用MVA法对石油化工装置电动机再起动的分析计算[J]. 电气应用 2020(02)
- [29].1180 MVA三相一体变压器冷却器在线冲洗研究[J]. 河南科技 2020(05)
- [30].16.5 MVA锰硅合金电炉的生产及设计[J]. 铁合金 2017(12)