论文摘要
目的:肺栓塞（PE）溶栓治疗后可出现再灌注损伤,其发生机制目前尚未完全阐明。一氧化氮（NO）是近年来研究较多的一个具有自由基性质的生物信息分子和效应分子;一氧化氮合酶（NOS）是生成NO的关键、唯一的限速酶。核转录因子（NF）-κB是一种具有多向性调节作用的快反应转录因子,能与多种基因启动子部位的κB位点特异性结合并促进转录。近年来研究发现NF-κB调节NO生成,并在肺E/R中起重要作用,但具体机制仍不十分明确。本研究制作了新西兰兔模型研究NF-κB对兔肺栓塞/再灌注（embolism/ reperfusion, E/R）损伤中NO、NOS变化的影响,并对肺E/R损伤的发生机制进行探讨。方法:本实验以新西兰大耳白兔,应用Berman球囊导管首先堵塞新西兰白兔左下肺动脉,然后球囊放气恢复肺组织血流供应,建立急性兔肺E/R损伤模型。观察肺组织形态学变化、肺组织匀浆及（或）肺泡灌洗液（BALF）中NO、NOS、丙二醛（MDA）、过氧化物歧化酶（SOD）的动态变化;采用免疫组织化学方法研究在肺E/R过程中NF-κBp65肺组织中的分布。结果:（1）光镜下HE染色显示E/R后肺呈弥漫性病变,内皮细胞肿胀,肺泡壁充血、水肿,大量炎细胞浸润,肺泡内有大量渗出物、红细胞等成分,部分肺组织实变。（2） MDA的变化:与对照组相比,肺组织均浆中MDA在肺栓塞2h时增高,再灌注1h后继续增高,并于再灌注2h达到高峰（0.68±0.05, 0.72±0.09, 0.84±0.07）。再灌注2h组MDA高于再灌注1h组（P<0.05）,并且明显高于肺栓塞2h组（P<0.05）。BALF中MDA的变化趋势与肺组织均浆中MDA的动态改变相同。（3） SOD的变化:与对照组相比,肺组织均浆中SOD在肺栓塞2h时开始降低,再灌注1h后继续降低,并于再灌注2h最为明显（418.66±78.93, 326.63±59.01, 253.81±35.12, P<0.05）;并且再灌注2h时明显低于栓塞2h（P<0.05）。BALF中SOD的变化趋势亦与肺组织均浆中SOD的动态改变相同。（4）NO的变化:与对照组相比,肺组织均浆中NO在肺栓塞2h时增高,再灌注1h后继续增高,并于再灌注2h达到高峰（2.24±0.38, 2.83±0.63, 4.26±0.83）。再灌注2h组NO高于再灌注1h组（P<0.05）,并且明显高于肺栓塞2h组（P<0.05）。BALF中NO的变化趋势与肺组织均浆中NO的动态改变基本相同。（5） NOS的变化:与对照组相比,肺组织均浆中iNOS在肺栓塞2h时增高,再灌注1h后继续增高,并于再灌注2h达到高峰（56.70±8.04, 70.35±6.36, 100.65±12.15）。再灌注2h组iNOS高于再灌注1h组（P<0.05）,并且明显高于肺栓塞2h组（P<0.05）;兔肺E/R各组（2E、2E/1R、2E/2R）肺组织cNOS （588.52±79.09, 539.50±73.81, 537.99±64.33, P>0.05）,与对照组、假手术组无显著性差异,对照组与假手术组之间亦无显著性差异（566.18±65.12, 563.20±85.93, P>0.05）。（6）随着肺E/R发生,免疫组织化学染色显示兔肺组织中NF-κBp65阳性细胞主要在肺泡上皮细胞、部分小血管内皮细胞、炎细胞（单核细胞、粒细胞）内大量表达。与假手术组相比,肺栓塞2h、再灌注1h、2h时,兔肺组织NF-κBp65的阳性面积均显著增高（P<0.05）。（7）相关性分析表明,NF-κBp65表达水平与肺组织中iNOS及NO的含量、BALF中NO含量呈显著负相关（P<0.05）;NF-κBp65阳性表达越高而灰度值越低。肺组织匀浆中iNOS表达水平与肺组织匀浆及BALF中NO含量呈显著正相关（P<0.01）;而cNOS表达水平与肺组织匀浆及BALF中NO含量均无相关关系（P>0.05）。肺组织匀浆及BALF中NO表达水平分别与肺组织匀浆及BALF中MDA含量呈显著正相关（P<0.01）;与肺组织匀浆及BALF中SOD的含量呈显著负相关（P<0.01）。结论:（1）本实验以新西兰大耳白兔,应用5F Berman球囊漂浮导管,在X线影像下,成功地建立肺E/R动物模型。（2）肺组织匀浆和BALF中MDA、SOD含量及肺组织HE染色结果提示肺E/R可导致肺组织氧化反应增强,引起肺损伤。（3）肺E/R过程中肺组织NF-κBp65、iNOS表达明显上调,NO产生显著增高,并且其间呈显著相关关系。（4）推测肺E/R损伤的可能机制之一为NF-κB活化并调控iNOS异常表达,短时间内产生大量NO,从而导致肺损伤发生。