JAK抑制剂AG490及Survivin基因表达在卵巢上皮性癌发展中的意义

论文摘要

目的:1探讨JAK--STAT（Janus激酶/信号转导和转录激活子）信号转导通路的抑制剂AG490在人卵巢癌上皮细胞株SKOV3中对survivin（存活素）基因表达的影响。2探讨survivin基因对肿瘤细胞增殖、凋亡影响的作用机制,以了解survivin在卵巢上皮性癌发展中的作用。3探讨AG490在抗卵巢肿瘤方面的研究价值和临床应用前景。研究表明JAK--STAT途径广泛参与细胞的增殖、分化以及免疫调节等过程,是多种细胞因子和生长因子信号转导的重要途径[1]。在正常细胞中,激活STATS是一个瞬时的过程,而在癌症细胞中,STATS蛋白被异常持续激活,其中STAT1和STAT2是自然免疫所必需,而STAT4和STAT6在获得免疫中发挥作用,STAT1的功能主要与生长抑制有关,而STAT3和STAT5可通过自身活化的增强,通过下游的基因表达的变化来抑制凋亡或诱导细胞增生作用参与肿瘤的发生发展,如bcl-2,细胞周期素及本文研究的survivin基因等等。方法:我们以代表卵巢上皮性癌的细胞株SKOV3做细胞培养,加用AG490处理后,用MTT比色试验检测细胞生长受抑制的情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况及细胞周期变化的情况,最后以免疫组化法检测STAT3、p-STAT3与survivin的表达变化情况。SKOV3细胞常规培养于含10%胎牛血清的RPMI--1640培养基中,取对数生长期的SKOV3细胞加不同浓度的AG490药物培养。按AG490药物浓度分组,分为0μmol/ L组即空白对照组、20μmol/ L处理组、40μmol/ L处理组、80μmol/ L处理组和160μmol/ L处理组,各个浓度处理组均于12小时、24小时、48小时时间点用四唑盐比色试验（MTT比色试验）检测细胞生长情况,计算细胞生长抑制率;用流式细胞仪（Flow Cytometry,FCM）检测用0μmol/ L组、20μmol/ L处理组、40μmol/ L处理组处理前后细胞凋亡的情况以及细胞周期变化的情况。免疫组化法分为对照组和40μmol/ L药物处理组,于药物处理的24小时检测STAT3、p-STAT3与survivin的表达率。结果:显微镜下每日观察对照组和各实验组细胞数量、大小和形态上的变化。正常情况下:显微镜下见SKOV3细胞呈单层贴壁生长,细胞长梭形或多角形,胞核圆形或椭圆形,胞浆透亮。经AG490处理后12小时,SKOV3细胞胞体开始变圆,胞浆透亮度下降,颗粒感增强,部分细胞脱落呈悬浮状,24小时细胞形态学改变更加明显,多数细胞呈圆形,脱落并成悬浮状态的细胞增多,并可见细胞碎片,48小时几乎80%以上的细胞呈圆形,培养液中可见大量悬浮细胞。MTT比色试验检测不同浓度（0-160μmo1/L ） AG490处理组SKOV3细胞在不同的时间点12小时、24小时、48小时生长情况,均出现一定程度的抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的现象,且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性。AG490处理细胞后出现细胞增殖活性降低,20,40,80和160μmol/ L处理组48小时细胞的生长抑制率分别为38.24%,53.08%,75.54%,84.25%,细胞生长减慢,细胞数减少。流式细胞术分析发现,AG490使SKOV3细胞周期阻滞于G2/M期,S期和G0/1期细胞数减少,细胞凋亡率明显增加;加用AG490后24小时就可看到明显的凋亡峰。48小时空白对照组的凋亡率约为5%,40μmol/ L药物处理组凋亡率可达33%,有显著性差异（P<0.05）。免疫组化法可以看到AG490可通过抑制JAK酶的活性从而抑制了STAT3的活化,STAT3的表达率由76.29%上升到80.66%,无显著性差异（P>0.05）,但是降低了其活化形式p-STAT3的表达,表达率由58.95%下降为20.67%,从而降低了survivin的表达,表达率由56.91%下降为16.24%,差异均具有统计学意义（P<0.05）。表明survivin的表达随着STAT3活化被抑制和p-STAT3的表达率下降而下降。结论:本实验药物AG490为JAK酶特异性抑制剂,通过抑制JAK酶的活性,可有效的阻断其下游的信号转导和转录激活子STATS的活化,影响JAK--STAT信号通路的转导和表达,从而使细胞的増殖受到抑制,细胞的凋亡率下降。在卵巢上皮性癌SKOV3细胞系中,AG490通过抑制JAK酶的活性,阻断STAT信号的活化,即降低了p-STAT3的表达水平,进而降低了其下游凋亡抑制蛋白survivivn的表达,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的异常増殖,说明survivin可能是卵巢上皮性癌的癌基因。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 JAK 抑制剂AG490 及survivin 基因表达在卵巢上皮性癌发展中的意义
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 JAK--STAT 信号转导通路与肿瘤发生的研究新进展
• 致谢
• 个人简历