REM睡眠剥夺对大鼠脑内不同部位基因表达影响的初步分析

论文摘要

睡眠是一个复杂的生理过程,正常人每天均有一个自然的睡眠觉醒周期,这是中枢神经系统主动产生的神经调节过程。睡眠对于机体的生长发育、学习记忆等方面均具有重要的意义。随着生活节奏的加快,睡眠剥夺现象普遍存在,并且对正常生活产生了巨大的影响。本研究建立大鼠睡眠剥夺24、48、72h模型,运用RT-PCR和免疫组化方法检测不同时间点大鼠脑内海马、皮质、小脑三个部位c-fos、nestin、bid3和jak2基因mRNA水平和蛋白水平的变化。为进一步研究睡眠剥夺所造成生理影响的分子机制提供线索。第一部分:RT-PCR检测c-fos、nestin、bid3和jak2基因mRNA水平变化方法:采用小平台水环境法建立大鼠REM睡眠剥夺24、48、72h模型,设立大平台对照组和正常饲养对照组,RT-PCR方法分别检测各组大鼠海马、皮质和小脑中c-fos、nestin、bid3和jak2的表达水平。结果:与空白对照组（C）比较,可见c-fos、bid3和jak2表达水平随SD时间延长而增加,且与大平台对照组（LP）存在统计学差异。而SD各组可见nestin表达水平降低,但与LP组比较,仅海马可见明显差异,皮质与小脑均无明显差别。第二部分:免疫组化检测Fos、Nestin、Bid3和Jak2蛋白水平变化方法:采用小平台水环境法建立大鼠REM睡眠剥夺24、48、72h模型,设立正常饲养对照组,免疫组化SP法分别检测各组大鼠海马、皮质和小脑中Fos、Nestin、Bid3和Jak2蛋白的表达水平。结果:与空白对照组（C）比较,SD组在海马、皮质、小脑三个部位Fos、Bid3和Jak2蛋白表达水平均有提高,而在这三个部位均未见明显Nestin阳性细胞。本研究结果显示:睡眠剥夺对大鼠中枢神经系统c-fos、nestin、bid3和jak2基因的mRNA和蛋白水平表达均有影响。总体而言,SD可以上调c-fos、bid3和jak2基因mRNA水平,且蛋白水平也有提高。同时,SD可以下调neatin表达水平。但同一基因在大脑不同部位表达水平并不一致,且在同一部位基因的mRNA水平与蛋白水平变化也不一致。可能与大脑不同部位对睡眠剥夺反应不一致相关,也与同一基因在不同中枢神经系统细胞中的功能不同有关。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 实验一 睡眠剥夺后大鼠脑内不同部位基因MRNA水平变化
• 1.材料
• 1.1 主要仪器
• 1.2 主要试剂
• 1.3 实验动物及分组
• 2 方法
• 2.1 睡眠剥夺模型的建立
• 2.2 取材
• 2.3 总RNA的提取
• 2.4 琼脂糖凝胶电泳
• 2.5 引物设计
• 2.6 RT-PCR
• 2.7 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 对照组及实验组RNA提取的电泳分析
• 3.2 RT-PCR
• 3.3 数据分析
• 4 讨论
• 4.1 关于动物模型
• 4.2 c-fos水平变化
• 4.3 nestin水平变化
• 4.4 bid3水平变化
• 4.5 jak2水平变化
• 实验二 睡眠剥夺后大鼠脑内蛋白水平变化
• 1.材料
• 1.1 主要仪器
• 1.2 主要试剂
• 1.3 实验动物及分组
• 2 方法
• 2.1 睡眠剥夺模型的建立
• 2.2 脑组织标本采集
• 2.3 免疫组织化学染色
• 3 结果
• 4 讨论
• 4.1 Fos水平变化
• 4.2 Nestin水平变化
• 4.3 Bid3和Jak2水平变化
• 全文总结
• 参考文献
• 附录
• 个人简历和研究成果
• 致谢