红芪多糖HPS4的提取分离及HPS4中四个组分结构特征和活性研究

论文摘要

本文主要研究了红芪多糖4（HPS4）及从中分离得到的四个多糖组分：HPS4-2A、HPS4-1A、HPS4-1B和HPS4-1C的结构特征及其抗氧化和抗凝血活性。用水提醇沉法从红芪中提取的粗多糖HPS4经DEAE纤维素阴离子交换和葡聚糖凝胶色谱柱的分离得到了HPS4-2A、HPS4-1A、HPS4-1B和HPS4-1C四个组分。采用甲基化、部分酸水解、气相色谱、气质联用、多角度激光散射仪、高效凝胶色谱、一维和二维核磁共振波谱技术对收率最高的组分HPS4-2A的结构进行了研究,结果显示HPS4-2A是一个氨基多糖,其分子量为272.0 kDa,主链主要由→4,6)α-D-Glcp（1→,→3,6）β-D-Galp（1→,→4,6）β-D-Galp（1→和→3,4）2-NAc-β-D-Galp（1→组成,分支分别位于以上四残基的O-6,O-3,O-6和O-4；侧链主要由阿拉伯糖和葡萄糖组成,并且还连有硫酸基,连接在→6）β-D-Galp（1→的6位,每隔27-32个残基重复出现一次。使用原子力显微镜（AFM）、透射电镜（TEM）、扫描电镜（SEM）以及十八角度激光散射仪（MALLS）对HPS4-2A的构象进行了分析,结果显示HPS4-2A的构象为高度分支化的构象,在水溶液中相互缠绕为球状。HPS4-1A的结构研究采用了与HPS4-2A相似的研究方法,研究结果显示HPS4-1A是一个中性杂多糖其分子量为73.86 kDa,HPS4-1A的结构及构象研究结果表明HPS4-1A主链骨架由→5）α-L-Araf[1→.→3,5)α-L-Araf（→1.→6）α-D-Galp（1→和→2,6）α-D-Galp（1→组成,侧链分支点位于阿拉伯糖的3位与半乳糖的2位。侧链分支由→4）α-D-Glcp（→1.→4,6）α-D-Glcp（→l.→2）α-L-Rhap（→和→2,4）α-L-Rhap(→1组成。其构象为无规线团状,并且具有单分散性,即表明摩尔质量分布范围较集中,分子大小较均一。除此之外还将HPS4-1B和HPS4-1C的理化性质（包括总糖含量、蛋白质含量、元素组成、单糖组成、糖醛酸含量及分子量）和构象进行了比较。体外抗氧化研究结果显示红芪多粗多糖HPS4的DPPH和羟基自由基的清除率最高,而经纯化后的组分中以HPS4-2A清除自由基的能力最好,HPS4-1A和HPS4-1B的清除自由基能力相当,HPS4-1C清除自由基的能力最弱。体外抗凝血结果表明四组分的抗凝血活性顺序为：HPS4-1C>HPS4-1B>HPS4-2A>HPS4,而HPS4-1A不具有抗凝血活性。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 多糖的定义
• 1.2 多糖结构研究的主要内容
• 1.2.1 提取
• 1.2.2 分离和纯化
• 1.2.2.1 脱蛋白
• 1.2.2.2 脱色素
• 1.2.2.3 多糖的纯化
• 1.2.3 纯度鉴定
• 1.2.4 分子量测定
• 1.2.5 单糖组成分析
• 1.2.6 部分酸水解
• 1.2.7 高碘酸氧化和Smith降解
• 1.2.8 甲基化分析
• 1.2.9 波谱分析
• 1.2.9.1 红外光谱（IR）
• 13C与¹HNMR)'>1.2.9.2 核磁共振波谱(¹³C与¹HNMR)
• 1.2.10 多糖的构象表征
• 1.3 红芪多糖的研究进展
• 1.3.1 红芪概述
• 1.3.2 红芪多糖研究进展
• 1.3.2.1 红芪多糖的药理活性研究进展
• 1.3.2.2 红芪多糖的结构研究进展
• 1.4 本文立题依据及研究内容
• 第二章 红芪多糖的提取、分离和纯化
• 2.1 实验部分
• 2.1.1 实验材料与仪器
• 2.1.1.1 实验材料与试剂
• 2.1.1.2 实验仪器
• 2.1.2 实验方法
• 2.1.2.1 HPS4的提取
• 2.1.2.2 HPS4脱蛋白、脱色素
• 2.1.2.3 HPS4-1与HPS4-2的分离纯化
• 2.1.2.4 HPS4中四组分的纯度鉴定
• 2.1.2.5 多糖的含量测定
• 2.2 实验结果与讨论
• 2.2.1 HPS4的提取
• 2.2.2 脱蛋白,脱色素
• 2.2.3 HPS4的分离纯化
• 2.2.4 HPS4中四多糖组分的纯度鉴定
• 第三章 红芪多糖的理化性质研究及构象研究
• 3.1 实验部分
• 3.1.1 实验材料与仪器
• 3.1.1.1 实验材料与试剂
• 3.1.1.2 实验仪器
• 3.1.2 红芪多糖理化性质研究
• 3.1.2.1 HPS4中四组分的总糖含量测定
• 3.1.2.2 HPS4中四组分蛋白质含量测定
• 3.1.2.3 HPS4中四组分元素分析
• 3.1.2.4 HPS4中四组分单糖组成测定
• 3.1.2.5 HPS4中四组分糖醛酸的测定
• 3.1.2.6 HPS4中四组分分子量的测定
• 3.1.3 红芪多糖构象研究
• 3.2 实验结果与讨论
• 3.2.1 HPS4中四组分的总糖含量测定
• 3.2.2 HPS4中四组分的元素分析结果
• 3.2.3 HPS4中四组分的蛋白质含量测定及糖醛酸测定
• 3.2.4 HPS4中四组分的单糖组成测定
• 3.2.5 HPS4中四组分的分子量测定结果及构象的初步分析
• 3.2.5.1 相对分子量的测定结果
• 3.2.5.2 绝对分子量的测定结果
• 3.2.6 HPS4中HPS4-1B,HPS4-1C及HPS4-2A三组分的构象分析
• 第四章 红芪多糖HPS4-1A与HPS4-2A的结构研究
• 4.1 实验部分
• 4.1.1 实验材料与仪器
• 4.1.1.1 实验材料与试剂
• 4.1.1.2 实验仪器
• 4.1.2 实验方法
• 4.1.2.1 部分酸水解
• 4.1.2.1 甲基化
• 4.1.2.2 红外光谱谱分析
• 4.1.2.3 核磁共振波谱分析
• 4.2 结果与讨论
• 4.2.1 部分酸水解结果
• 4.2.2 甲基化结果
• 4.2.2.1 HPS4-1A的甲基化结果
• 4.2.2.2 HPS4-2A的甲基化结果
• 4.2.3 红外分析结果
• 4.2.3.1 HPS4-2A的红外分析结果
• 4.2.4 核磁共振波谱（NMR）分析结果
• 4.2.4.1 HPS4-1A的核磁共振波谱分析结果
• 4.2.4.2 HPS4-2A的核磁共振波谱分析结果
• 第五章 红芪多糖的抗氧化活性和抗凝血活性研究
• 5.1 实验部分
• 5.1.1 实验材料与仪器
• 5.1.1.1 实验材料与试剂
• 5.1.1.2 实验仪器
• 5.1.2 实验方法
• 5.1.2.1 抗凝血实验方法
• 5.1.2.2 抗氧化实验方法
• 5.2 实验结果与讨论
• 5.2.1 HPS4及HPS4中四组分的抗凝血实验结果
• 5.2.2 HPS4及HPS4中四组分的抗氧化实验结果
• 第六章 结论
• 参考文献
• 附图
• 硕士期间发表的论文及科研成果
• 致谢