论文摘要
本实验室方定志等从一种模型大鼠构建了肝脏差异表达基因消减cDNA文库，该模型大鼠具有代谢综合征某些特征，生化分析发现其血浆葡萄糖和甘油三酯浓度显著升高，呈现明显的高凝状态，非常类似于代谢综合征。本室用从该大鼠模型肝脏差异表达基因消减cDNA文库找到的差异表达EST筛选人肝脏cDNA文库克隆到一个差异表达新基因，暂命名为代谢综合征相关基因（metabolic syndrome related gene,MSRG）。为了探讨MSRG的功能及其在MS和动脉粥样硬化中的作用，我室首先在mRNA表达水平上对该基因的功能进行了研究，本实验即是在以往本室研究的基础上，观察葡萄糖（glucose,G）、胰岛素（insulin）及胰高血糖素（Glycagon）对该基因表达的影响及其与糖脂代谢的关系。第一部分实验：首先设计荧光定量PCR适用的引物和探针，选择β-actin做内参照，建立较准确的检测MSRG mRNA表达水平的Taqman荧光定量PCR方法。用不同浓度葡萄糖（2．8 mmol/L，5．6 mmol/L，11．1 mmol/L，22mmol/L，和33．3 mmol/L。以甘露醇做渗透压对照）、胰岛素(0mol/L，10-10mol/L，10-9mol/L，10-8mol/L，10-7mol/L，10-6mol/L)、胰高血糖素(0mol/L，10-11mol/L，10-10mol/L，10-9mol/L，10-8mol/L，10-7mol/L，10-6mol/L)培养人肝癌细胞株HepG2细胞48小时，用实时荧光定量PCR方法检测MSRG的表达变化。结果显示葡萄糖刺激实验G22和G33．3组HepG2细胞MSRG表达明显增加，G5．6和G11．1组间表达无显著差异，甘露醇对MSRG的表达无明显影响；胰岛素刺激实验10-7mol/L，10-6mol/L胰岛素组HepG2细胞MSRG表达明显减少；胰高血糖素对MSRG表达无显著影响。第二部分实验：为进一步探讨MSRG的功能，根据第一部分实验结果，我们选择葡萄糖、胰岛素培养HepG2细胞MSRG表达有差异的浓度点研究MSRG基因表达与糖脂代谢的关系，HepG2细胞用5．6 mmol/L、22 mmol/L、33．3 mmol/L葡萄糖，0mol/L、10-7mol/L、10-9mol/L胰岛素培养基培养48小时后，荧光定量PCR方法检测细胞MSRG基因表达量的改变，同时检测细胞内、培养液中的葡萄糖、糖原、甘油三酯、胆固醇等生化指标的变化水平。结果表明：22mmol/L、33．3mmol/L葡萄糖培养HepG2细胞使MSRG基因的转录水平显著升高，G33．3组与G22、G5．6组比较细胞内葡萄糖、甘油三酯、糖原含量均显著增加，培养基中的TG也明显增多，G22与G5．6组比较细胞内甘油三酯、糖原含量显著增加，培养基中TG明显增多。10-7mol/L胰岛素组与0 mol/L、10-9mol/L胰岛素组比较MSRG的表达明显下降，细胞内葡萄糖、甘油三酯、糖原含量明显增多，培养基中甘油三酯含量显著增加，葡萄糖水平明显降低（p＜0．05）。10-9mol/L组细胞内甘油三酯含量增加而培养基中葡萄糖水平明显降低。结果提示高浓度葡萄糖刺激人肝癌细胞株HepG2细胞可明显促进MSRG的表达，使细胞内的葡萄糖、甘油三酯、糖原含量显著增加，同时培养基中的甘油三酯含量伴随增多；高浓度胰岛素使人肝癌细胞株HepG2细胞MSRG的表达明显下降，细胞内葡萄糖、甘油三酯、糖原浓度显著增加，培养基中的葡萄糖含量逐渐减少。
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标签：葡萄糖论文; 胰岛素论文; 胰高血糖素论文; 代谢综合征相关基因论文; 实时荧光定量论文;