东北贯众抗H1N1亚型猪流感病毒有效组分的研究

论文摘要

东北贯众为粗茎鳞毛蕨（Dryopteris crassirhizoma Nakai）干燥的根茎及叶柄基部,始载于《神农本草经》。在我国分布较广,主产于黑龙江地区,东北贯众低毒,具有改善子宫平滑肌、抗肿瘤等作用,已为国内外研究的热点。目前东北贯众的形态结构、生殖方式、鉴别及药理活性等方面有了比较详细的报道,但国内外学者对东北贯众抗病毒活性方面研究较少,东北贯众抗H1N1亚型猪流感病毒（H1N1亚型SIV）的活性研究未见报道。为了确定东北贯众抗H1N1亚型SIV活性组分及其化学成分,本实验以东北贯众30%、60%乙醇提取物为研究材料,在MDCK细胞上采用MTT法筛选两种组分的安全浓度,在此浓度下,采用细胞病变抑制法测定不同组分对H1N1亚型SIV诱导病变的MDCK细胞的保护率,反应出体外抗病毒活性。结果表明,60%乙醇组分抗H1N1亚型SIV活性与浓度相关, 60%乙醇组分抗H1N1亚型SIV活性显著,30%乙醇组分抗H1N1亚型SIV活性不显著。因此,确定东北贯众60%乙醇组分为抗H1N1亚型SIV的主要活性组分。利用硅胶、ODS及HPLC等多种分离手段对东北贯众60%乙醇组分进行分离纯化,从该组分中分离出8个化合物,采用1H-NMR和13C-NMR等波谱学手段进行结构解析,确定了5个化合物的化学结构,它们是表儿茶素,（Z）-3,5,5-trimethyl-4-（3（-3,4,5-trihydroxy-6（-hydroxymethyl）-tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy）butylidene）cyclohex-2-enone,β-谷甾醇,对羟基苯基丙烯酸,儿茶素。对5个化合物中含量最大的表儿茶素用细胞病变抑制法结合MTT比色法进行体外抗H1N1亚型SIV活性实验。结果表明,表儿茶素具有显著抗H1N1亚型猪流感病毒活性,对H1N1亚型SIV诱导病变的MDCK细胞保护率达到52%。本文通过对东北贯众抗H1N1亚型猪流感病毒有效组分的筛选、有效组分中化学成分的分离鉴定以及单体化合物表儿茶素的活性测定,进一步揭示了传统中药东北贯众抗病毒活性的物质基础,为研制和开发新型抗病毒的新药提供了重要的科学依据。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 第1章 绪论
• 1.1 东北贯众的研究现状
• 1.1.1 东北贯众的植物学形态
• 1.1.2 东北贯众主要化学成分
• 1.1.3 东北贯众药理作用
• 1.2 猪流感病毒的研究现状
• 1.2.1 猪流感病毒结构特征
• 1.2.2 猪流感病毒的危害
• 1.2.3 抗猪流感病毒药物的研究现状
• 1.3 本论文研究主要内容、目的及意义
• 第2章 东北贯众抗H1N1 亚型猪流感病毒有效组分筛选
• 2.1 引言
• 2.2 实验材料与仪器
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 实验仪器
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 东北贯众不同组分样品制备
• 2.3.2 单层MDCK 细胞培养
• 2.3.3 东北贯众不同组分对MDCK 细胞的安全浓度筛选
• 2.3.4 东北贯众不同组分抗H1N1 亚型猪流感病毒活性实验
• 2.4 结果与分析
• 2.4.1 MDCK 细胞计数
• 2.4.2 不同组分对MDCK 细胞安全浓度测定
• 2.4.3 不同组分抗H1N1 亚型猪流感病毒活性的对比
• 第3章 东北贯众抗H1N1 亚型猪流感病毒有效组分的分离纯化
• 3.1 引言
• 3.2 实验材料与仪器
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 实验仪器
• 3.3 有效组分的分离纯化
• 3.4 结果与分析
• 3.4.1 化合物1 的结构确定
• 3.4.2 化合物2 的结构确定
• 3.4.3 化合物3 的结构确定
• 3.4.4 化合物4 的结构确定
• 3.4.5 化合物5 的结构确定
• 3.5 本章小结
• 第4章 表儿茶素抗H1N1 亚型猪流感病毒活性研究
• 4.1 引言
• 4.2 实验材料与仪器
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 实验仪器
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 达菲、表儿茶素对MDCK 细胞药物安全浓度筛选
• 4.3.2 表儿茶素抗H1N1 亚型猪流感病毒实验
• 4.4 结果与分析
• 4.4.1 达菲在MDCK 细胞上药物安全浓度筛选结果与分析
• 4.4.2 表儿茶素在MDCK 细胞上药物安全浓度筛选结果与分析
• 4.4.3 表儿茶素抗H1N1 亚型猪流感病毒实验结果与分析
• 4.5 本章小结
• 第5章 结论
• 参考文献
• 附录1
• 附录2
• 致谢