灵芝蛋白的提取、酶解及抗氧化性能研究

论文摘要

灵芝[Ganoderma Lucidum]是一种营养和保健价值极高的药用真菌。现代科学证明其具有免疫调节,抗肿瘤,抗衰老,清除氧自由基,活血化瘀,抗凝血,降血糖及护肝的功效,已引起医药工业界和保健品行业不少专家的关注。本文主要研究了赤灵芝水溶性蛋白水提取工艺及优化、醇溶性蛋白醇提取工艺及优化、灵芝蛋白的酶解及酶解产物的理化分析检测和性能,这对新型药物及功能保健品的开发具有重要意义。本文主要研究内容及成果如下:1.灵芝蛋白水提取工艺优化研究根据所建立的响应面数学模型进行参数最优化选择,得出水溶性蛋白提取率最优的条件为:液料比34.4mL/g,浸提温度26.56℃,浸提时间8.87h,pH8.9。在此优化工艺下水溶性蛋白提取率的预测值为82.59mg/g,验证实验中实际测得水溶性蛋白提取率为81.35mg/g,预测值与实际值无显著差异。诸因素对水溶性蛋白提取率的影响大小顺序为:pH值﹥提取温度﹥提取时间﹥液料比,其中pH值的对试验指标的影响极其显著。2.灵芝蛋白醇提取工艺优化研究以赤灵芝为原料,采用乙醇提取醇溶性蛋白,并通过单因素实验和正交实验研究浸提时间、温度、pH、液料比及提取次数对醇溶性蛋白提取率的影响,确定赤灵芝醇溶性蛋白提取的最佳工艺。单因素实验表明,提取时间8h,液料比40mL/g,乙醇浓度70%,pH3.0,醇溶性蛋白含量最高。正交实验得出各因素对灵芝醇溶性蛋白得率的影响程度大小依次为:pH值>液料比>提取温度>乙醇浓度。优选出较优工艺条件:乙醇浓度60%,pH 2.5,液料比40 mL/g,提取温度65℃,提取时间8h,提取次数2次。在验证实验中实际测得醇溶性蛋白提取率为10.82%。3.灵芝蛋白酶解物的性能研究采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法考察灵芝蛋白,酶解灵芝蛋白,并检测灵芝蛋白酶解物的氨基酸成分及含量,考察灵芝蛋白及其酶解物的抗氧化性能。结果表明,灵芝蛋白液具有明显的抗氧化活性,且酶解后的灵芝蛋白液清除的羟自由基的能力和还原力都得到了增强。含灵芝蛋白4.2mg/mL的灵芝蛋白液的还原力同0.05mg/mL的Vc的还原力相当。随着灵芝蛋白浓度增加,清除·OH自由基的能力增强;当灵芝蛋白的浓度为0.28mg/mL时,其·OH自由基清除率为19.22%,且清除?OH自由基的能力与灵芝蛋白的浓度之间的关系可以用对数方程来描述。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 灵芝生物学研究进展
• 1.1.1 主要生物活性成分
• 1.1.2 灵芝的药理作用
• 1.2 灵芝蛋白类活性成分研究进展
• 1.2.1 灵芝中蛋白质的种类和形式
• 1.2.2 灵芝蛋白的生物学活性
• 1.3 活性多肽蛋白类化合物的分离纯化方法研究概况
• 1.3.1 蛋白质浓度测定方法
• 1.3.2 分离纯化中蛋白质的不稳定性及其预防措施
• 1.3.3 蛋白质纯度的鉴定
• 1.4 本课题研究的意义、目标与主要内容
• 1.4.1 研究的意义
• 1.4.2 研究的目标
• 1.4.3 研究的主要内容
• 第二章 灵芝水溶性蛋白提取工艺优化
• 2.1 引言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 主要实验材料和化学试剂
• 2.2.2 主要仪器设备
• 2.2.3 实验方法
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 牛血清白蛋白标准曲线的绘制
• 2.3.2 时间对水溶性蛋白提取率的影响
• 2.3.3 液料比对水溶性蛋白提取率的影响
• 2.3.4 温度对水溶性蛋白提取率的影响
• 2.3.5 pH对水溶性蛋白提取率的影响
• 2.3.6 提取次数对水溶性蛋白提取率的影响
• 2.3.7 响应面分析以及提取工艺的优化
• 2.4 结论
• 第三章 灵芝醇溶性蛋白提取工艺研究
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 主要试剂
• 3.2.2 主要仪器
• 3.2.3 实验方法
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 牛血清白蛋白标准曲线的绘制
• 3.3.2 醇溶性蛋白提取工艺研究
• 3.4 本章结论
• 第四章 灵芝蛋白的酶法水解及其抗氧化性能
• 4.1 引言
• 4.2 仪器和试剂
• 4.2.1 主要仪器
• 4.2.2 主要试剂
• 4.2.3 实验方法
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 灵芝蛋白提取液蛋白质的含量
• 4.3.2 灵芝蛋白凝胶电泳
• 4.3.3 蛋白水解酶的活力
• 4.3.4 水解实验结果
• 4.3.5 灵芝蛋白水解液抗氧化作用
• 4.4 小结
• 结论与展望
• 参考文献
• 攻读博士/硕士学位期间取得的研究成果
• 致谢