论文摘要
研究目的 （1）克隆原生动物阴道毛滴虫（Trichomonas vaginalis）长寿保障基因（Longevity assurance gene 1 LAG1）同源基因:Tv-LAG1。构建Tv-LAG1原核表达重组体及表达其融合蛋白。（2）在模式生物阴道毛滴虫cDNA消减杂交文库中,筛选和鉴定阴道毛滴虫细胞周期及衰老相关基因。材料和方法 （1）从阴道毛滴虫cDNA表达文库中筛选LAG1的同源基因,并对其序列保守结构域进行同源性分析。用pET41表达载体与Tv-LAG1 cDNA克隆构建原核表达重组体,在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（isopropylthio-β-D-galactoside IPTG）诱导下表达目的基因融合蛋白,Ni-NTA亲和层析纯化表达产物,SDS-PAGE鉴定表达产物的分子量及纯化效果。用纯化的融合蛋白免疫家兔,获得抗血清,采用Western blot法对抗体特异性进行分析鉴定。（2）采用反转录PCR技术进一步分析鉴定cDNA消减杂交文库中分离到的15个cDNA克隆。结果（1）从阴道毛滴虫cDNA表达文库中成功筛选出长寿保障基因LAG1的同源基因（Tv-LAG1）。其cDNA克隆含910对碱基,其编码框长834 bp,推测蛋白质序列含有277个氨基酸。从植物到人类的结构域序列分析提示,Tv-Lag1p与酵母Lag1p及其它同源蛋白均有同源性。其中与拟芥兰相比,在258个氨基酸的序列区,同源性达到23%。其次为人类Lag1p同源蛋白质,在216个氨基酸