检测硝基咪唑类药物、莱克多巴胺和安定残留的酶联免疫法的建立

论文摘要

在畜牧业生产中,使用抗生素添加剂和生长促进剂无疑会提高生产效率和带来巨大经济效益,但兽药在动物产品中的残留不仅危害到消费者的身体健康,对人体产生诸如致癌,致突变等毒副作用,引起细菌耐药性的增加,而且同时影响我国畜禽产品的出口贸易。目前许多国家和地区均通过各种途径来控制或降低畜产品中的药剂残留量,以保护消费者的安全。然而,在经济利益的驱动下,养殖业中非法添加兽药的现象越来越多。为了保护人民的身体健康,必须从在各个环节上确保畜产品的安全,从源头进行控制的有效手段。因此研究食品中药物残留检测方法具有重要的意义。目前,食品中药物残留检测方法主要有色谱法、免疫法和微生物检测法。色谱法虽然测定精确,但是仪器昂贵,且要求专业人员操作；微生物法简单,但只能定性分析,不能定量分析。而我们所研究的酶联免疫法,既可以大批量定性分析,又可以定量分析。在本论文中,我建立了检测硝基咪唑类药物、莱克多巴胺和安定类药物的酶联免疫检测法。对于硝基咪唑类药物的检测,首先洛硝哒唑水解产物与戊二酸酐生成洛硝哒唑半抗原。分别采用混合酸酐法将半抗原与血清蛋白反应生成包被抗原,用EDC法将半抗原与血蓝蛋白反应生成免疫抗原。用间接显色酶联免疫法检测硝基咪唑抗体,结果：IC50=0.2 ng/mL,在食品中检测线为0.1 ng/mL,得到的抗体与其他结构或功能相似的药物交叉率很小,检测食品中硝基咪唑类药物的回收率84-114%,变异系数<14%。对于莱克多巴胺药物的检测,分别采用EDC法将半抗原与牛血清蛋白反应生成包被抗原。用化学发光酶联免疫法检测硝基咪唑抗体,结果：IC50=0.35ng/mL,在食品中检测线为0.1 ng/mL,得到的抗体与其他结构或功能相似的药物交叉率很小,检测食品中硝基咪唑类药物的回收率92%和110%之间,变异系数小于10%。对于安定药物的检测,首先将安定与羟甲基羟胺生成半抗原。采用混合酸酐法分别将半抗原与反应生成甲状腺载体蛋白制得免疫原,与人血清蛋白生成免疫原。用间接显色酶联免疫法检测硝基咪唑抗体,结果：IC50=0.145 ng/mL,在食品中检测线为0.1 ng/mL,得到的抗体与其他结构或功能相似的药物交叉率很小,检测食品中安定药物的回收率68-92%,变异系数小于20%。通过以上研究,我们成功的制备了检测硝基咪唑类药物、莱克多巴胺和安定药物的试剂盒。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 第一章 前言
• 1.1 药物残留检测方法
• 1.2 酶联免疫分析法的应用及发展前景
• 1.3 硝基咪唑类药物、莱克多巴胺及安定的概述
• 1.3.1 硝基咪唑类药物
• 1.3.2 莱克多巴胺的概述
• 1.3.3 安定药物的概述
• 1.4 本文的目的和设计思路
• 第二章 硝基咪唑类药物、莱克多巴胺和安定抗体的制备
• 2.1 硝基咪唑类药物、莱克多巴胺和安定免疫原的制备
• 2.1.1 免疫原制备概述
• 2.1.2 硝基咪唑免疫原制备
• 2.1.3 莱克多巴胺免疫原的制备
• 2.1.4 安定药物免疫原的制备
• 2.2 硝基咪唑类药物、莱克多巴胺和安定抗体的制备
• 2.2.1 小鼠免疫
• 2.2.2 饲养细胞的制备
• 2.2.3 细胞融合
• 2.2.4 筛选分泌抗体的杂交瘤细胞
• 2.2.5 杂交瘤细胞的克隆化培养
• 2.2.6 杂交瘤细胞的冻存与复苏
• 2.2.7 单克隆抗体的大量制备（腹水制备）
• 第三章 酶联免疫吸附检测法
• 3.1 ELISA检测类型
• 3.2 硝基咪唑类药物酶联免疫检测法的研究
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 方阵法优选单克隆抗体最佳测定浓度
• 3.2.3 间接酶联免疫吸附测定法测定单克隆抗体效价
• 3.2.4 竞争酶联免疫吸附测定法测定抗体灵敏度
• 3.2.5 硝基咪唑抗体交叉反应率（特异性）的测定
• 3.2.6 实际体系中药物回收率和变异系数的检测
• 3.2.7 总结
• 3.3 莱克多巴胺的化学发光免疫检测的研究
• 3.3.1 实验材料
• 3.3.2 化学发光ELISA最佳条件的测试
• 3.3.3 莱克多巴胺抗体效价的测定
• 3.3.4 化学发光ELISA法测莱克多巴胺单克隆抗体的灵敏度
• 3.3.5 莱克多巴胺抗体交叉反应率
• 3.3.6 实际体系中ELISA检测
• 3.3.7 总结
• 3.4 安定酶联免疫检测法的研究
• 3.4.1 实验材料
• 3.4.2 方阵法优选单克隆抗体最佳测定浓度
• 3.4.3 竞争酶联免疫吸附测定法测定抗体
• 3.4.4 安定抗体交叉反应率（特异性）的测定
• 3.4.5 实际体系中药物回收率和变异系数的检测
• 3.4.6 总结
• 第四章 结束语
• 参考文献
• 附表
• 致谢
• 本人发表的文章和专利
• 学位论文评阅及答辩情况表