液相色谱-离子阱质谱联用技术在胍丁胺、CTN-986和AGEs裂解剂代谢研究中的应用

论文摘要

液相色谱-离子阱质谱联用（LC/ITMS）由于具有多级质谱结构解析功能而在药物代谢研究中被广泛应用。候选化合物的体内代谢研究和体外早期代谢筛选是新药研发的关键过程。 胍丁胺具有镇痛、降低成瘾性、抗抑郁等作用,其乙酰化代谢产物报道较少。采用同相萃取法结合稳定同位素标记的LC-MSn技术成功检出大鼠尿中胍丁胺及其乙酰化代谢产物,并进行了结构确认。黄酮苷类化合物具有抗抑郁等多种活性近年备受关注,但能否在血液中检测到完整分子存在争论。本文优化了实验方法,用紫外及LC-MSn在小鼠血液和脑匀浆中检测到CTN-986原型,提示CTN-986能被小肠上皮细胞吸收。 建立了LC/ITMS研究AGEs裂解剂系列化合物的早期ADME筛选方法,稳定可靠,通量较高。67个化合物筛选结果表明:（1）系列化合物肝微粒体代谢稳定性较高,孵育残余量随时间变化呈现4种类型,除“急速下降型”外,其余60%化合物推荐进行后续研究;（2）噻吩环或硒吩环的存在可增加代谢稳定性;（3）caco-2细胞渗透率超过50%的化合物占57%,咪唑类化合物的渗透性明显优于噻唑类化合物,硒吩环取代苯环可改善其渗透性。 AGEs裂解剂系列化合物主要有2种质谱裂解方式:咪（噻）唑类以环间C-C和C-N断裂为主,咪唑并硒唑类以开环为主。咪（噻）唑类2位碳取代与否将得到明显不同的碎片离子基峰,表明裂解途径明显改变。利用所得图谱建立了相关化合物的电喷雾离子阱质谱数据库。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 第一章 胍丁胺及黄酮苷CTN-986的体内代谢分析
• 一、大鼠尿中胍丁胺及其代谢产物的识别与确认
• 1 仪器、试药与动物
• 2 动物给药与样品收集
• 3 分析方法的建立
• 3.1 储备液的配制与对照品的制备
• 3.2 原型药的质谱电离方式
• 3.3 最低检测限的确定
• 3.4 样品前处理方法
• 3.5 液-质联用条件的选择
• 4 结果与讨论
• 4.1 尿中胍丁胺的识别与确认
• 4.2 尿中乙酰胍丁胺的识别与确认
• n图谱分析'>4.3 MSⁿ图谱分析
• 4.4 其它可能的代谢产物
• 4.5 样品前处理方法
• 二、小鼠血浆及脑匀浆中CTN-986的识别与确认
• 1 仪器、试药与动物
• 2 动物给药与样品采集
• 3 分析方法的建立
• 3.1 色谱条件与质谱测定参数
• 3.2 样品前处理方法
• 3.3 精密度、重复性及稳定性
• 3.4 标准曲线与线性范围
• 3.5 萃取方法
• 4 结果与讨论
• 4.1 浆和脑匀浆中CTN-986的识别与确认
• 4.2 血浆和脑匀浆中CTN-986的初步定量
• 4.3 影响黄酮苷检出的因素
• 三、小结
• 第二章 AGEs裂解剂系列化合物的体外代谢筛选
• 一、实验方法及评价
• 1 仪器与材料
• 2 实验方法
• 2.1 肝微粒体孵育实验
• 2.2 caco-2细胞渗透性实验
• 2.3 样品处理与分析方法
• 3 方法评价
• 3.1 检测限与线性关系
• 3.2 精密度与稳定性
• 3.3 肝微粒体与caco-2细胞活性评价
• 3.4 系列化合物在空白孵育液中的稳定性
• 3.5 分析通量
• 4 系列化合物及其代谢产物的识别
• 二、系列化合物肝微粒体孵育代谢稳定性分析
• 1 实验结果
• 2 分析与讨论
• 2.1 AGEs裂解剂系列化合物代谢稳定性整体分析
• 2.2 化合物的结构与代谢稳定性的关系
• 2.3 代谢产物的初步推断
• 三、系列化合物caco-2细胞吸收渗透性分析
• 1 实验结果
• 2 分析与讨论
• 2.1 AGEs裂解剂系列化合物caco-2细胞渗透性整体情况
• 2.2 化合物的结构与caco-2细胞渗透性的关系
• 四、小结
• 第三章 电喷雾离子阱质谱数据库的建立及AGEs裂解剂质谱裂解规律分析
• 一、AGEs裂解剂系列化合物的化学结构特征
• 二、电喷雾离子阱质谱数据库的建立
• 1 仪器、试药与软件
• 2 质谱数据的采集及数据库建立
• 3 数据库的检索与查询
• 三、AGEs裂解剂系列化合物质谱裂解规律分析
• 1 咪（噻）唑类
• 2 咪唑并硒唑类
• 四、小结
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 在读期间发表文章