论文摘要
第一章药物转运蛋白基因的遗传多态性对替米沙坦药动学的影响研究背景替米沙坦（telmisartan）是一种血管紧张素Ⅱ（AngiontensinⅡ,AngⅡ）1型（AT1）受体拮抗药,具有高选择性、不可逆地拮抗AT1受体,而不抑制血管紧张素转换酶,不影响缓激肽的效应;也不与其它激素受体和离子通道结合或产生阻断作用,因而不影响包括心血管调节在内的其它受体系统。近年来对替米沙坦研究的范围还涉及有心血管（心力衰竭、心肌肥厚、心肌梗死等）、内分泌（糖尿病等）、肾病（糖尿病肾病、蛋白尿等）和神经系统（脑卒中）等众多领域,其已成为近年来心血管领域研究的热点,倍受临床关注。替米沙坦的体内药物浓度及降压疗效存在很大的个体差异,而导致这种差异的原因目前尚不明确。多种药物转运蛋白参与替米沙坦的吸收（Absorption）、分布（Distribution）、代谢（Metabolism）、排泄（Excretion）过程,且研究表明,多种编码药物转运蛋白的基因存在单核苷酸基因多态性,遗传因素所导致的药物转运蛋白活性的差异可能是导致替米沙坦血药浓度和药物反应性个体差异的原因之一。替米沙坦的体内过程主要受MDR1（多药耐药蛋白1,Multidrug resistance 1,又名P-gp）、MRP2（多药耐药相关蛋白2,Multidrug resistance-related protein 2）和OATP1B3（有机阴离子转运体1B3亚型,Organic anion transporters 1B3）药物转运蛋白的影响,而上述转运蛋白的基因多态性可影响各自底物的血药浓度及药代动力学。因此,本章我们从健康受试者及高血压患者两大人群出发,探讨上述三种转运蛋白的基因多态性是否影响替米沙坦在人体内的药代动力学特征及降压疗效。方法采用限制性片段长度内切酶（PCR-RFLP）的方法对60名中国健康男性志愿者的MDR1 C3435T、MRP2 G1249A、MRP2 C3972T、OATP1B3T334G和OATP1B3 G699A位点进行基因分型,从中挑选适合的基因型个体进行进一步的研究。基因型符合要求的受试者按照40 mg的剂量单次口服替米沙坦片,并于服药前（0 h）及服药后0.25 h、0.5 h、0.75 h、1 h、1.5 h、2 h、3 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、24 h、48 h分别采集肘静脉血5 mL,分离血浆,采用HPLC-MS（High performance liquid chromatogram-mass spectrometry,高效液相色谱—质谱检测器）法测定受试者体内不同时间点血浆中替米沙坦的药物浓度。采用DAS 2.0软件计算替米沙坦的药代动力学参数,并使用SPSS 13.0软件包比较基因型组间替米沙坦的药动学参数。选择符合1999年WHO/ISH诊断标准的原发性高血压病人,治疗前测定基础血压。按照每天一次,每次40 mg的给药剂量,连续服用替米沙坦片30天,测定治疗30天后的血压,采集第30天服药前血样,进行替米沙坦稳态血浆药物谷浓度的测定并对MDR1 C3435T、MRP2 C3972T、OATP1B3T334G和OATP1B3 G699A位点进行基因分型。采用HPLC-FLD法测定血浆中替米沙坦的浓度,使用SPSS 13.0软件包比较基因型组间替米沙坦的稳态谷浓度及疗效间的差异。结果MDR1 C3435T、MRP2 G1249A、MRP2 C3972T、OATP1B3 T334G和OATP1B3 G699A位点的等位基因发生频率与文献报道及HapMap中报道的结果基本一致,其中OATP1B3 T334G和OATP1B3 G699A位点间呈完全连锁不平衡。19位参加药动学研究的受试者,服药后替米沙坦的平均药动学参数Tmax、Cmax、t1/2、AUC0-48和AUC0-∞分别为1.4±0.7 h（0.5～3.0 h）、312.7±279.7μg·L-1(26.4～871.7μg·L-1)、13.9±8.1 h（2.5～38.9 h）、1477.4±927.4μg·h·L-1(184.8～3134.0μg·h·L-1)和1662.3±1100.1μg·h·L-1(194.7～3816.2μg·h·L-1)。个体间替米沙坦的上述药物代谢动力学参数问都存在很大的个体差异。经方差分析及独立样本t检验,替米沙坦的药动学参数在MDR1C3435T、MRP2 G1249A、MRP2 C3972T和OATP1B3 T334G/G699A位点不同基因型个体间均无显著性差异。58位高血压患者治疗前后的血压分别为164/94 mmHg（SBP变化范围:220～130 mmHg;DBP变化范围:128～70 mmHg）和143/87 mmHg（SBP变化范围:194～110 mmHg;DBP变化范围:110～65 mmHg）,服用替米沙坦30天后,其血浆中药物稳态谷浓度为50.10±6.95μg·L-1(波动范围:0.34μg·L-1～258.42μg·L-1),个体间的药物血药浓度同样存在很大的个体差异。经统计学分析,MDR1 C3435T、MRP2 C3972T、OATP1B3T334G/OATP1B3 G699A基因多态性对替米沙坦的稳态谷浓度变化没有影响。MRP2 C3972T基因多态性与治疗前后收缩压的变化值有关,基因型为3972TT的个体表现出更好的降压效果。结论MDR1 C3435T、MRP2 G1249A、MRP2 C3972T、OATP1B3 T334G/G699A位点的基因多态性不影响健康中国男性志愿者替米沙坦的药物代谢动力学。MDR1 C3435T、MRP2 C3972T、OATP1B3 T334G/OATP1B3G699A基因多态性与高血压患者替米沙坦的稳态谷浓度间无相关性,但MRP2 C3972T多态可以影响替米沙坦降低收缩压的作用程度。第二章SIRT1和DDAH1基因的遗传多态性对中国人替米沙坦降压疗效的影响研究背景高血压病是近半个世纪以来影响人类健康和生活质量、导致人类死亡的重要疾病之一。替米沙坦是AT1受体阻断剂,临床上广泛应用于高血压病的治疗。研究发现在不同人种中,替米沙坦对轻、中度高血压治疗的有效率约为52%-56%,且其降压疗效存在很大的个体差异,大量的患者在使用替米沙坦单一药物进行治疗时需要加大剂量或联合使用其他降压药物。然而到目前为止,导致这种显著地药物反应性个体差异的原因仍尚不明确。随着对替米沙坦药理作用研究的不断深入,人们发现替米沙坦除具有降压作用外,还具有改善胰岛素抵抗和糖、脂代谢紊乱,及抗动脉粥样硬化的作用,上述作用可能与替米沙坦增加PPAR-γ（Peroxisome proliferatoractivated receptor-γ,过氧化物酶体增生物激活受体-γ）蛋白表达、上调DDAH（Dimethylarginine dimethylaminohydrolase,二甲基精氨酸二甲氨水解酶）表达和降低ADMA（Asymmetric dimethylarginine,非对称性二甲基精氨酸）浓度有关。SIRT1属于沉默信息调节因子2（Sir2）家族成员,该蛋白家族的活性依赖于烟酰胺腺嘌呤二核昔酸（NAD+）的去乙酰化酶,其在调节基因表达、细胞凋亡、代谢和老化过程中发挥重要作用。有研究发现AT1受体基因的近侧启动子区（-61bp到+25bp）包含SP1结合位点,SIRT1能够抑制SP1结合到AT1受体基因启动子上,从而下调AT1受体的表达,进而影响AngⅡ发挥缩血管效应,因此我们推测,DDAH1和SIRT1基因的遗传多态性可能在受体后水平影响替米沙坦的降压疗效。本研究从药物作用受体后信号通路蛋白出发,研究SIRT1和DDAH1基因的遗传多态性对替米沙坦降压疗效的影响,从而寻找影响替米沙坦降压疗效的SNP,为临床合理应用替米沙坦进行降压治疗提供指导。方法原发性高血压患者58例,应用题米沙坦治疗前测量基础血压,并抽取5 ml肘静脉血,分离血浆用于测定基础状态ADMA的浓度,血细胞用于DNA的提取。入组的病人按照每天一次、每次40 mg的给药剂量,连续服用替米沙坦30天。试验第31天服药前测量治疗后血压,并抽取肘静脉血7 ml,用于治疗后ADMA浓度的测定。采用PCR-RFLP法对DDAH1 C143611G、DDAH1 C144563T和SIRT1C-1138T位点进行基因分型;使用HPLC-MS法测定治疗前后血浆中ADMA的浓度。使用SPSS 13.0软件包选取适当的统计学方法对替米沙坦的降压疗效及治疗前后ADMA水平的变化情况进行基因型组间的比较。结果高血压患者中DDAH1 C143611G、DDAH1 C144563T和SIRT1C-1138T位点的等位基因频率及基因型与HapMap中报道的中国北京人群的基因分布特征一致。58例高血压患者完成了本项研究,治疗前患者血浆中ADMA的浓度为0.355±0.014μmol·L-1(波动范围:0.632μmol·L-1～0.106μmol·L-1)。按照每天给药一次,每次40 mg的剂量,连续服用替米沙坦片30天后,其血浆中ADMA的浓度为0.455±0.020μmol·L-1(波动范围:0.759μmol·L-1～0.140μmol·L-1),其中14例患者治疗后血浆ADMA的浓度降低,44例患者治疗后血浆ADMA的浓度升高,治疗前后血浆ADMA的浓度存在显著的差异（p＜0.001）。DDAH1 C143611G多态与替米沙坦的降压疗效无关,但DDAH1C144563T多态与替米沙坦治疗前后收缩压（SBP）和舒张压（DBP）的改变程度有关;SIRT1 C-1138T多态与舒张压的变化程度有关。结论DDAH1 C144563T及SIRT1 C-1138T多态可影响替米沙坦的降压疗效。
论文目录
相关论文文献
标签：替米沙坦论文; 药物转运蛋白论文; 基因多态性论文; 药代动力学论文; 单核苷酸基因多态性论文;