液相微萃取/后萃取 ——高效液相色谱法在中药有效成分分析中的应用及萃取机理研究

论文摘要

目的采用液相微萃取/后萃取-高效液相色谱法建立中药样品中有效成分厚朴酚与和厚朴酚分析前处理的方法,为复杂样品中中药有效成分的分离、纯化和浓缩提供一种有效、简便、环境友好的样品前处理方法。方法利用自制的液相微萃取装置,优化被分析物的液相微萃取条件,包括溶剂载体中空纤维的种类、萃取溶剂、供相与接受相、搅拌速度和萃取时间。被分析物在优化的液相微萃取条件下被萃取后,收集接受相进入高效液相色谱仪进行分析。中药样品中厚朴酚与和厚朴酚的优化液相微萃取条件为:聚丙烯腈纤维为溶剂载体,正丁醇为萃取有机溶剂,pH 5的25 %甲醇水溶液为供相、pH 12的NaOH水溶液为接受相,搅拌速度为900 r/min,萃取时间为30 min;色谱条件为:C18柱,流动相为甲醇:水（82.5:17.5）,流速0.8 ml/min,柱温28℃,检测波长为294 nm。结果中药样品中厚朴酚与和厚朴酚的线性范围分别为1.56μg/ml156μg/ml和1.10μg/ml110μg/ml,相关系数大于0.99,精密度小于2.9 %,检测限（S/N=3）分别为0.10μg/ml和0.07μg/ml,平均回收率分别为98.3 %105 %和96.8 %103 %。结论该方法能有效去除复杂机体的干扰,提高选择性,有机溶剂消耗少,是一种简便、有效、环境友好的中药有效成分分析前处理的方法。目的采用液相微萃取/非水后萃取-高效液相色谱法建立生物样品中厚朴酚与和厚朴酚分析前处理的方法,为复杂样品中中药有效成分的分离、纯化和浓缩提供一种有效、简便、环境友好的样品前处理方法。方法利用自制的液相微萃取装置,优化被分析物的液相微萃取条件,包括溶剂载体中空纤维的种类、萃取溶剂、供相与接受相、搅拌速度和萃取时间。被分析物在优化的液相微萃取条件下被萃取后,收集接受相进入高效液相色谱仪进行分析。生物样品中厚朴酚与和厚朴酚的优化液相微萃取条件为:聚偏氟乙烯纤维（MOF503）为溶剂载体,正丁醇为萃取溶剂,含50 %甲醇的生物样品为供相、纯甲醇为接受相,搅拌速度为600 r/min,萃取时间为10 min;色谱条件为:C18柱,流动相为甲醇:水（82:18）,流速1.0 ml/min,柱温30℃,检测波长294 nm。结果生物样品中厚朴酚与和厚朴酚的线性范围分别为0.150μg/ml30.0μg/ml和0.100μg/ml30.0μg/ml,相关系数大于0.90,精密度小于7.5 %,平均回收率分别为93.7 %114 %和90.5 %109 %,血浆中的检测限分别为30 ng/ml和20 ng/ml,肝脏中分别为25 ng/ml和15 ng/ml,肾脏中均为10 ng/ml。结论该方法能有效去除生物样品中复杂机体的干扰,提高了选择性,有机溶剂消耗少,是一种简便、灵敏、环境友好的生物样品目标成分分析前处理的方法。目的选择结构明确的苯丙酸类化合物咖啡酸、阿魏酸、对羟基桂皮酸、对甲氧基桂皮酸和桂皮酸作为模型化合物,阐明以中空纤维为支持体的三相液相微萃取萃取机理;建立浓缩倍数与模型化合物分配系数、结构、理化参数之间的关系,为液相微萃取成为中药样品分离、纯化和浓缩的前处理技术提供理论依据。方法利用自制的液相微萃取装置,优化了被分析物的液相微萃取条件,包括溶剂载体——纤维的种类、萃取溶剂、供相与接受相、搅拌速度和萃取时间。被分析物在优化的液相微萃取条件下萃取后,收集接受相进入高效液相色谱仪进行分析。中药样品中咖啡酸、阿魏酸、对羟基桂皮酸、对甲氧基桂皮酸和桂皮酸的优化液相微萃取条件为:聚偏氟乙烯纤维（MOF503）为溶剂载体、正庚醇为萃取有机溶剂、pH 3的HCl分析物水溶液为供相、pH 11.7的NaOH为接受相、搅拌速度为1800 r/min、萃取时间为60 min;色谱条件为:C18柱,流动相为甲醇:0.3 %磷酸（53:47）,流速为1.0 ml/min,柱温28℃,检测波长为285 nm。结果初步阐明了以中空纤维为支持体的三相液相微萃取“电荷转移超分子”机理,构建了苯丙酸类化合物浓缩倍数与模型化合物分配系数、结构、理化参数之间的关系,其中浓缩倍数EF与其正庚醇/水表观油水分配系数lgP有良好相关性,回归方程为EF = 113. 99lgP-245.38,相关系数R2=0.9653。苯丙酸类药物的线性范围为:咖啡酸0.25～2.5×103ng/ml;阿魏酸1.25～5.0×103ng/ml;对羟基桂皮酸0.10～1.0×103ng/ml;对甲氧基桂皮酸0.50～2.0×103ng/ml;桂皮酸0.20～2.0×103 ng/ml,相关系数均大于0.99。日内精密度小于6.3 %,日间精密度小于6.6 %。检测限实验:咖啡酸0.025 ng/ml;阿魏酸0.250 ng/ml;对羟基桂皮酸0.004 ng/ml;对甲氧基桂皮酸0.100 ng/ml;桂皮酸0.050 ng/ml。双黄连口服液中咖啡酸的含量为0.2528 mg/ml,平均回收率为100.3 %;浓缩当归丸中阿魏酸的含量为0.2137 mg/g,平均回收率为99.2 %;桂枝茯苓丸中桂皮酸的含量为0.0128 mg/g,平均回收率为99.4 %。结论初步阐明了以中空纤维为支持体的三相液相微萃取萃取机理的研究,建立了苯丙酸类化合物浓缩倍数与模型化合物分配系数、结构、理化参数之间的关系,为该类化合物分离优化模型的建立提供了基础,为液相微萃取成为中药样品分析前处理技术提供了理论依据。实验证明液相微萃取是一种操作简便、快速、环境友好、能有效去除复杂机体干扰的中药样品前处理方法。

论文目录

• 前言
• 第一部分 液相微萃取/后萃取-高效液相色谱法测定中药厚朴及其制剂中厚朴酚与和厚朴酚的含量
• 摘要
• Abstract
• 1. Experiment
• 2. Results and discussion
• 3. Conclusions
• 第二部分 液相微萃取/非水后萃取-高效液相色谱法测定大鼠体内厚朴酚与和厚朴酚的浓度
• 摘要
• Abstract
• 1. 实验部分
• 2. 实验方法
• 3. 结果与讨论
• 第三部分 苯丙酸类药物液相微萃取/后萃取机理研究及应用
• 摘要
• Abstract
• 1 实验部分
• 2 实验方法
• 3 结果与讨论
• 【综述】液相微萃取技术在中药分析中的应用
• 参考文献
• 【作者简历】
• 【致谢】