代谢综合征患者脂联素、视黄醇结合蛋白4表达及其性别差异的机制研究

论文摘要

背景和目的:代谢综合征（Metabolic syndrome,MS）是一组以中心性肥胖、胰岛素抵抗（Insulin resisitin,IR）、高血压、血脂异常、糖调节受损或2型糖尿病为主要表现的临床症候群,其病理生理基础为IR。MS发病机制尚不十分清楚,近年来的研究显示,中心性肥胖、脂肪组织内分泌功能失调可能在其中发挥重要作用,相关研究已成为本领域热点,备受关注。脂肪组织能够分泌多种脂肪细胞因子参与调节机体各系统和组织的功能,影响胰岛素敏感性、血压水平、内皮功能、纤溶活动及炎症反应等,参与多种重要病理生理过程。脂联素（Adiponectin,APN）是脂肪细胞特异分泌的蛋白激素,研究表明,其具有抗IR、抗MS、抗动脉粥样硬化和抗炎症等作用,有望成为以IR为特征的、肥胖相关性疾病如MS、2型糖尿病、心血管病等的预测性诊断指标和新的治疗研究靶点。视黄醇结合蛋白4（Retinol binding protein 4,RBP4）是新近发现的脂肪细胞因子,研究表明,其参与糖代谢调节,并诱导IR。目前尚完全不清楚RBP4在人体内的病理生理调节机制,也未明了RBP4在MS发病机制中的作用及其影响因素。本课题从临床角度入手,观察MS患者血清APN、RBP4水平的临床特征,探讨其在MS中可能的作用及其与MS各组分的关系。先前的研究已提示,血清APN、RBP4水平均存在显著的性别差异,机制尚不清楚,一般认为与性激素有关,有待进一步研究。为明确相关机制,本课题分别进行了相关指标的血清水平、离体脂肪组织及体外脂肪细胞蛋白表达及其相关因素的研究,并对上述推论进行探讨。研究分为三个部分:⑴MS患者血清APN、RBP4水平变化的临床特征及与性激素内环境状态的相关性研究,明确APN和RBP4在MS中可能的作用及其与MS各组分的关系、性别差异特点,以及与垂体-性腺轴多种性激素、性激素结合蛋白（Sex hormone binding globulin,SHBG）血浆水平的关系;⑵MS患者腹内（网膜）脂肪及皮下脂肪APN及其受体1（Adiponectin receptor 1,Adipo R1）、RBP4蛋白表达的研究,明确中心性肥胖时上述指标在不同性别、不同部位脂肪组织的表达特点,探讨其与血清ANP、RBP4及性激素水平的关系;⑶性激素对3T3-L1前脂肪细胞和脂肪细胞APN、Adipo R1、RBP4蛋白表达的影响,及性激素对3T3-L1前脂肪细胞分化成熟和成脂的影响的研究,初步探讨MS患者APN和RBP4表达存在性别差异与性激素相关性的分子机制。材料方法:整个研究分临床和基础实验两部分。临床研究是对临床研究对象一般资料及有关指标血清水平进行观察;基础实验是针对临床研究对象腹内及皮下脂肪组织和3T3-L1前脂肪细胞及诱导分化为成熟脂肪细胞进行的研究。1.将临床研究对象分为MS组、非代谢综合征（NMS）组和健康对照（C）组,测量体脂参数、血压,检测一般生化指标,测定糖代谢指标、脂代谢指标、炎症指标、血清APN和RBP4等水平,问卷调查吸烟、饮酒习惯。探讨MS患者血清APN、RBP4水平变化的临床特征及其影响因素。2.将临床研究对象分为（中心性）肥胖组（n=50）和非肥胖组（n=34）,测量一般临床指标,测定血清APN、RBP4、性激素及SHBG等水平。探讨MS患者血清APN、RBP4的性别差异特征与性激素内环境状态的关系。3.采用免疫荧光法定性测定腹内和皮下脂肪组织APN、Adipo R1、RBP4的表达和分布;蛋白免疫印迹（Western blot）方法测量腹内和皮下脂肪组织APN、Adipo R1、RBP4的蛋白表达,进行男女组间及MS和C组亚组间的比较;探讨腹内和皮下脂肪组织APN、Adipo R1、RBP4表达与血清水平之间的关系及其和性激素内环境状态的关系。4.采用油红染色、光镜观察10-10M（低生理浓度）、10-8M（生理浓度）、10-6M（超生理浓度）雌二醇（E2）和3×10-10M（低生理浓度）、3×10-8 M（生理浓度）、3×10-6M（超生理浓度）睾酮（T）干预下3T3-L1前脂肪细胞和脂肪细胞中脂滴聚集情况,并计算油红染色脂滴面积占总面积的百分比,比较不同浓度、不同种类性激素对3T3-L1前脂肪细胞和脂肪细胞成脂作用的差异。5.3T3-L1前脂肪细胞实验分组:未诱导性激素干预组、诱导同时性激素干预组和诱导成熟时性激素干预组,同时分为上述不同浓度干预亚组,以及C组;采用Western blot方法测量3T3-L1前脂肪细胞和脂肪细胞APN、Adipo R1、RBP4的蛋白表达;探讨性激素对3T3-L1细胞APN、Adipo R1、RBP4蛋白表达的影响,初步探讨APN、RBP4存在显著性别差异的分子机制。结果:1.临床研究显示:⑴MS组血清RBP4水平显著增加,血浆APN水平显著降低,并存在性别差异:男性血清RBP4水平显著高于女性,男性血清APN水平显著低于女性。⑵血清RBP4水平与性别和BMI独立相关;血清APN水平与WC和血清视RBP4水平独立相关。⑶MS组血清T和E2激素水平呈与性别相反表达,血清SHBG水平显著降低,性激素内环境变化与血清RBP4、APN水平可能相关。2.定性观察人体腹内和皮下脂肪组织APN、Adipo R1、RBP4均有表达,分布以细胞膜为主。3.离体脂肪组织研究显示:⑴脂肪组织APN、Adipo R1、RBP4的蛋白表达均存在性别差异。⑵MS组网膜脂肪组织APN表达显著降低,男性显著低于女性;女性比男性皮下脂肪组织APN表达显著增高。⑶女性MS组网膜脂肪组织Adipo R1表达显著降低;女性MS组网膜脂肪组织Adipo R1表达显著高于男性MS组;女性网膜和皮下脂肪组织Adipo R1表达均显著高于男性;男性皮下脂肪组织Adipo R1表达显著高于腹内脂肪组织。⑷男性MS组网膜脂肪组织RBP4表达显著降低,并显著低于女性MS组;男性皮下脂肪组织RBP4表达显著低于女性。女性皮下脂肪组织RBP4表达显著高于腹内脂肪组织。4.3T3-L1细胞培养后油红染色、比较成脂情况:⑴未诱导性激素干预组,72h时E210-8M干预组成脂显著强于C组,其他各组与C组差异无显著意义。⑵诱导同时性激素干预组,与C组相比,不同浓度E2和T干预组成脂情况与C组差异无显著意义。⑶诱导成熟时性激素干预组,与C组相比,E210-10M干预组、E210-8M干预组和T 3×10-8 M干预组成脂情况显著增强,而T 3×10-10M干预组显著减弱。5.3T3-L1细胞培养:⑴未诱导性激素干预组,与对照组相比,E210-10M干预组和不同浓度T干预组细胞APN表达均显著增高,T 3×10-10M干预组、T 3×10-6M干预组细胞Adipo R1表达均显著增高,T 3×10-10M干预组细胞RBP4表达显著降低;⑵诱导同时性激素干预组,T 3×10-8 M干预组细胞APN表达显著增高,T 3×10-8 M干预组和T 3×10-6M干预组细胞Adipo R1表达均显著增高,E210-6M干预组细胞Adipo R1表达均显著降低,T 3×10-8 M干预组和T 3×10-6M干预组细胞RBP4表达均显著增高,E210-6M干预组细胞RBP4表达显著降低;⑶诱导成熟时性激素干预组,E210-8M干预组和T 3×10-8 M干预组细胞APN表达均显著增高,不同浓度T干预组细胞Adipo R1表达均显著增高,E210-10M干预组、E210-8M干预组和不同浓度T干预组细胞RBP4表达均显著增高。结论:1.MS患者血清RBP4水平显著增加、APN水平显著降低,血清RBP4、APN水平均与多种MS组分密切相关,且与APN与RBP4独立相关。2.MS患者体内存在性激素内环境紊乱,主要表现为性别相关性性激素下调趋势和血清SHBG的显著降低;血清RBP4、APN水平均存在显著的性别差异,与血清性激素及SHBG水平密切相关。3.人体腹内和皮下脂肪组织APN、Adipo R1、RBP4均有表达,分布以细胞膜为主,且均存在性别差异。⑴MS患者网膜脂肪组织APN和Adipo R1表达特点及性别差异与APN血清水平特征相似,表明APN在MS时血浆水平显著降低,是由于腹内脂肪细胞APN分泌显著减少所致,且APN对脂肪组织Adipo R1表达可能具有正向调节作用,从而进一步影响APN生物学效应的发挥。⑵MS患者腹内脂肪组织RBP4表达特点及性别差异与血清RBP4水平特征不一致,表明MS时及男性血循环中RBP4增高并非来源于腹内脂肪组织,可能与机体代谢因素和其他器官组织功能的影响相关。4.生理浓度、低生理浓度的E2和生理浓度的T均对诱导成熟的脂肪细胞具有促进成脂的作用,而低生理浓度的T则有抑制作用。5.性激素对3T3-L1前脂肪细胞和脂肪细胞APN、Adipo R1、RBP4的蛋白表达均有影响,不同浓度的E2、T的干预作用不同,可能提示MS时性激素内环境变化在一定程度上可能影响脂肪组织APN、RBP4的表达。综上所述,MS时血清和脂肪组织APN、AdipoR1、RBP4的异常变化在一定程度上受性激素的调节,这种调节可能参与了MS组分形成、糖脂代谢紊乱等病理生理过程。

论文目录

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• 论文正文
• 第一部分 代谢综合征患者血清脂联素、视黄醇结合蛋白4水平变化的临床特征
• 分题一 代谢综合征患者血清脂联素、视黄醇结合蛋白4水平变化及影响因素
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 分题二 代谢综合征患者血清脂联素、视黄醇结合蛋白4水平变化及与性激素内环境的相关性研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二部分 代谢综合征患者腹部脂肪脂联素及其受体1、视黄醇结合蛋白4蛋白表达的研究.
• 分题一 人体腹部脂肪脂联素及其受体1、视黄醇结合蛋白4的表达和分布
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 分题二 代谢综合征患者腹部脂肪脂联素及其受体1的变化
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 分题三 代谢综合征患者腹部脂肪视黄醇结合蛋白4的变化
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第三部分 性激素对3T3-L1前脂肪细胞和脂肪细胞脂联素及其受体1、视黄醇结合蛋白4蛋白表达的影响
• 分题一 性激素对3T3-L1前脂肪细胞成脂的作用
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 分题二 性激素对3T3-L1前脂肪细胞和脂肪细胞脂联素及其受体1、视黄醇结合蛋白4蛋白表达的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 全文结论
• 致谢
• 照片
• 文献综述 脂肪组织内分泌功能的研究进展
• 参考文献
• 攻读博士学位期间发表论文
• 英文论著