谢婷婷:印楝素A无细胞合成体系构建及其合成前体论文

谢婷婷:印楝素A无细胞合成体系构建及其合成前体论文

本文主要研究内容

作者谢婷婷,汤锋,高全,王煜炜,王越(2019)在《印楝素A无细胞合成体系构建及其合成前体》一文中研究指出:【目的】印楝素是一种植物源杀虫剂,印楝素A是印楝素的主要活性成分。本研究通过对印楝素A无细胞合成体系制备条件和反应条件的优化,以及印楝素A合成前体的筛选,探讨印楝素A的离体生物合成途径,以为指导构建印楝素异源生物合成平台,实现印楝素的异源生物合成奠定基础。【方法】通过对缓冲液类型、浓度、起始pH、提取时间及料液比进行单因素试验及正交试验优化,构建印楝素A无细胞合成体系;从反应终止试剂及稳定剂、反应温度、反应时间、底物浓度以及辅助因子5个方面优化无细胞合成体系的反应条件。利用印楝素A无细胞合成体系分别以2,3-环氧鲨烯、羊毛甾醇、大戟二烯醇、丁酰鲸鱼醇、nimbin、茄碱苷和脱乙酰茄碱苷为底物,以印楝素A相对产量为评价标准,探讨印楝素A合成前体。【结果】印楝素A无细胞合成体系的构建:以pH7.0的200 mmol·L-1Tris-HCl缓冲液,按1∶20(g·mL-1)料液比加入印楝叶片,提取1 h。优化的印楝素A无细胞合成条件为:反应总体积800μL,其中含印楝无细胞提取物300μL(相当于印楝叶0.015 g),100μL 250μmol·L-1的底物(鲨烯)和400μL含有1 mmol·L-1Mg2+、1 mmol·L-1Mn2+、0.1 mmol·L-1 ATP、0.1 mmol·L-1NADPH+和5 mmol·L-1抗坏血酸的缓冲液,在30℃下反应60 min,迅速加入200μL乙酸终止反应。分别以2,3-环氧鲨烯、丁酰鲸鱼醇、大戟二烯醇、nimbin、茄碱苷和脱乙酰茄碱苷为底物,反应完成后,印楝素A含量均有不同程度的增加;羊毛甾醇抑制体系中印楝素A的合成。【结论】羊毛甾醇不是印楝素A的合成前体,2,3-环氧鲨烯和丁酰鲸鱼醇是印楝素A的前体,nimbin、大戟二烯醇、脱乙酰茄碱苷和茄碱苷极可能是印楝素A的合成前体,且茄碱苷位于合成途径较下游的位置。

Abstract

【mu de 】yin lian su shi yi chong zhi wu yuan sha chong ji ,yin lian su Ashi yin lian su de zhu yao huo xing cheng fen 。ben yan jiu tong guo dui yin lian su Amo xi bao ge cheng ti ji zhi bei tiao jian he fan ying tiao jian de you hua ,yi ji yin lian su Age cheng qian ti de shai shua ,tan tao yin lian su Ade li ti sheng wu ge cheng tu jing ,yi wei zhi dao gou jian yin lian su yi yuan sheng wu ge cheng ping tai ,shi xian yin lian su de yi yuan sheng wu ge cheng dian ding ji chu 。【fang fa 】tong guo dui huan chong ye lei xing 、nong du 、qi shi pH、di qu shi jian ji liao ye bi jin hang chan yin su shi yan ji zheng jiao shi yan you hua ,gou jian yin lian su Amo xi bao ge cheng ti ji ;cong fan ying zhong zhi shi ji ji wen ding ji 、fan ying wen du 、fan ying shi jian 、de wu nong du yi ji fu zhu yin zi 5ge fang mian you hua mo xi bao ge cheng ti ji de fan ying tiao jian 。li yong yin lian su Amo xi bao ge cheng ti ji fen bie yi 2,3-huan yang sha xi 、yang mao zai chun 、da ji er xi chun 、ding xian jing yu chun 、nimbin、jia jian gan he tuo yi xian jia jian gan wei de wu ,yi yin lian su Axiang dui chan liang wei ping jia biao zhun ,tan tao yin lian su Age cheng qian ti 。【jie guo 】yin lian su Amo xi bao ge cheng ti ji de gou jian :yi pH7.0de 200 mmol·L-1Tris-HClhuan chong ye ,an 1∶20(g·mL-1)liao ye bi jia ru yin lian xie pian ,di qu 1 h。you hua de yin lian su Amo xi bao ge cheng tiao jian wei :fan ying zong ti ji 800μL,ji zhong han yin lian mo xi bao di qu wu 300μL(xiang dang yu yin lian xie 0.015 g),100μL 250μmol·L-1de de wu (sha xi )he 400μLhan you 1 mmol·L-1Mg2+、1 mmol·L-1Mn2+、0.1 mmol·L-1 ATP、0.1 mmol·L-1NADPH+he 5 mmol·L-1kang huai xie suan de huan chong ye ,zai 30℃xia fan ying 60 min,xun su jia ru 200μLyi suan zhong zhi fan ying 。fen bie yi 2,3-huan yang sha xi 、ding xian jing yu chun 、da ji er xi chun 、nimbin、jia jian gan he tuo yi xian jia jian gan wei de wu ,fan ying wan cheng hou ,yin lian su Ahan liang jun you bu tong cheng du de zeng jia ;yang mao zai chun yi zhi ti ji zhong yin lian su Ade ge cheng 。【jie lun 】yang mao zai chun bu shi yin lian su Ade ge cheng qian ti ,2,3-huan yang sha xi he ding xian jing yu chun shi yin lian su Ade qian ti ,nimbin、da ji er xi chun 、tuo yi xian jia jian gan he jia jian gan ji ke neng shi yin lian su Ade ge cheng qian ti ,ju jia jian gan wei yu ge cheng tu jing jiao xia you de wei zhi 。

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  • 论文详细介绍

    论文作者分别是来自林业科学的谢婷婷,汤锋,高全,王煜炜,王越,发表于刊物林业科学2019年09期论文,是一篇关于印楝素论文,无细胞合成体系论文,前体筛选论文,生物合成途径论文,林业科学2019年09期论文的文章。本文可供学术参考使用,各位学者可以免费参考阅读下载,文章观点不代表本站观点,资料来自林业科学2019年09期论文网站,若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权,请联系我们删除。

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