基于细胞凋亡线粒体途径的参术胶囊阻断脾虚胃癌发生的作用机制研究

论文摘要

目的：研发阻断胃癌发生的药物具有深远的社会意义和经济意义。根据前期研究表明,具有健脾功效的中药五类新药参术胶囊对胃癌及癌前病变具有治疗作用。其机制尚未完全阐明。细胞凋亡是目前肿瘤研究的重点。我们拟通过细胞凋亡线粒体途径研究参术胶囊阻断脾虚胃癌发生的机制,为中药复方新药的研究提供思路。方法：用MTT法检测参术胶囊对胃癌细胞株是否具有抑制生长的作用；用光镜下直接观察和姬姆萨染色技术研究术胶囊对MKN45细胞株的一般形态学产生的影响；用电子显微镜技术研究参术胶囊对MKN45细胞株超微结构的影响；复制诱发性脾虚胃癌小鼠模型；观察参术胶囊给诱发性脾虚胃癌小鼠模型灌胃30d后,体重、5min自发活动数、脾虚表现（大便小干、腹胀、耸毛、眯眼、拉尾反射阳性等）的变化；HE染色观察参术胶囊是否阻断脾虚胃癌的发生；用TUNEL法研究参术胶囊对诱发性脾虚胃癌模型细胞凋亡指数的影响；用免疫组化法研究参术胶囊对诱导脾虚胃癌模型CEA、Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl2、P53等指标的影响。结果：MTT法显示参术胶囊作用24h能使MKN45细胞株OD值降低。光镜下直接观察和姬姆萨染色后观察显示参术胶囊作用24h后,部分细胞变小、变圆,细胞膜完整但出现发泡现象；细胞核变小、着色较深、结构混乱、染色质边聚。电镜显示参术胶囊能造成细胞核内染色质聚成团块,核膜完整,细胞内线粒体肿胀,胞浆内空泡增加,滑面内质网扩张,细胞膜完整,有突起。参术胶囊作用脾虚胃癌小鼠模型30d后,能降低模型动物死亡率,缓解诱发性脾虚胃癌小鼠模型脾虚状态,其病理表现较模型组明显减轻,TUNEL结果显示参术胶囊提高模型动物细胞凋亡,免疫组化结果显示参术胶囊能增强模型动物CytC、Bax、P53、Caspase-3、Caspase-9表达,抑制CEA、Bcl2表达。结论：参术胶囊能抑制胃癌细胞株MKN45生长,能阻断脾虚胃癌的发生,抑制其发展。线粒体途径诱导细胞凋亡是其重要作用机制。主要途径可能为参术胶囊导致P53增多, Bax表达增强, Bcl2表达减弱,使线粒体肿胀,膜电位下降,膜通透性提高,CytC从孔隙进入胞液,使Caspase-9增多,引发下游Caspase-3活化,最终导致凋亡发生。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 1 胃癌的演变过程
• 1.1 胃癌癌前疾病与胃癌癌前病变
• 1.1.1 胃癌癌前疾病
• 1.1.2 胃癌癌前病变
• 1.2 胃癌的发展
• 1.2.1 早期胃癌
• 1.2.2 进展期胃癌
• 2 细胞凋亡与胃癌治疗
• 2.1 细胞凋亡在胃癌发生中的作用
• 2.2 细胞凋亡与胃癌西药治疗
• 3 健脾益气法能阻断胃癌发生
• 3.1 脾虚是胃癌发生的重要因素
• 3.2 参术胶囊是传统经方阻断胃癌发生的现代创新发现
• 4 从线粒体途径诱导细胞凋亡可能是参术胶囊阻断胃癌发生的重要机制
• 4.1 细胞凋亡可能是参术胶囊阻断胃癌发生的重要机制
• 4.2 线粒体途径诱导细胞凋亡可能是参术胶囊阻断胃癌发生的重要机制
• 5 本课题主要研究思路和手段
• 实验研究
• 1 参术胶囊诱导胃癌细胞MKN45凋亡的作用机制研究
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 细胞株
• 1.1.2 受试药物
• 1.1.3 阳性药物
• 1.1.4 主要试剂
• 1.1.5 主要液体配制
• 1.1.6 主要实验仪器
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 参术胶囊对MKN45细胞活性的影响
• 1.2.2 参术胶囊对MKN45细胞显微结构的影响
• 1.2.3 参术胶囊对MKN45细胞超微结构的影响
• 1.3 结果
• 1.3.1 参术胶囊对MKN45细胞活性的影响
• 1.3.2 参术胶囊对MKN45细胞显微结构的影响
• 1.3.3 参术胶囊对MKN45细胞超微结构的影响
• 2 参术胶囊诱导脾虚胃癌动物模型细胞凋亡的研究
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 阳性药物
• 2.1.3 受试药物
• 2.1.4 试剂
• 2.1.5 实验器械
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 参术胶囊对诱发性脾虚胃癌模型一般指标的影响
• 2.2.2 参术胶囊对诱发性脾虚胃癌模型细胞凋亡指数的影响
• 2、Caspase-3、Caspase-9、P53的表达的影响'>2.2.3 参术胶囊对诱发性脾虚胃癌模型CEA、CytC、Bax、Bcl₂、Caspase-3、Caspase-9、P53的表达的影响
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 脾虚表现
• 2.3.2 一般形态学观察
• 2.3.3 参术胶囊对诱发性脾虚胃癌动物模型CEA表达的影响
• 2.3.4 参术胶囊对诱发性脾虚胃癌动物模型凋亡指数的影响
• 2.3.5 参术胶囊对诱发性脾虚胃癌动物模型P53表达的影响
• 2.3.6 参术胶囊对诱发性脾虚胃癌动物模型Bax表达的影响
• 2表达的影响'>2.3.7 参术胶囊对诱发性脾虚胃癌动物模型Bcl₂表达的影响
• 2.3.8 参术胶囊对诱发性脾虚胃癌动物模型CytC表达的影响
• 2.3.9 参术胶囊对诱发性脾虚胃癌动物模型Caspase-9表达的影响
• 2.3.10 参术胶囊对诱发性脾虚胃癌动物模型Caspase-3表达的影响
• 讨论
• 1 细胞凋亡与线粒体途径
• 2家族'>1.1 Bcl₂家族
• 1.2 P53
• 1.3 CytC
• 1.4 Caspase家族
• 2 参术胶囊与细胞凋亡
• 2.1 中药诱导肿瘤细胞凋亡研究现状
• 2.1.1 研究对象
• 2.1.2 研究方法
• 2.1.3 研究内容
• 2.1.4 动物模型
• 3 参术胶囊通过线粒体途径阻断脾虚胃癌发生
• 3.1 参术胶囊诱导MKN45细胞细胞凋亡可能与线粒体途径有关
• 3.1.1 参术胶囊对MKN45细胞生长具有抑制作用
• 3.1.2 参术胶囊能诱导MKN45细胞凋亡
• 3.2 基于细胞凋亡线粒体途径的参术胶囊阻断脾虚胃癌发生的作用机制
• 3.2.1 诱发性脾虚胃癌动物模型的使用
• 3.2.2 参术胶囊能阻断脾虚胃癌发生
• 3.3 基于细胞凋亡线粒体途径的参术胶囊阻断脾虚胃癌发生的作用机制
• 3.3.1 参术胶囊诱导诱发性脾虚胃癌动物模型细胞凋亡
• 3.3.2 参术胶囊诱导诱发性脾虚胃癌动物模型细胞凋亡的作用机制
• 结论
• 问题与展望
• 致谢
• 参考文献
• 附件一:综述
• 参考文献
• 附件二:公开发表的学术论文、专著及科研成果