三碘甲状腺原氨酸对缺氧复氧未成熟心肌细胞凋亡的保护作用及Connexin43蛋白调控机制研究

三碘甲状腺原氨酸对缺氧复氧未成熟心肌细胞凋亡的保护作用及Connexin43蛋白调控机制研究

论文摘要

目的:低甲状腺腺素被认为与病人重症监护期的短期死亡率和心脏疾病的长期死亡率密切相关。本实验探讨对离体培养乳鼠心肌细胞在缺氧复氧前短期给予三碘甲状腺原氨酸(T3)是否能减少未成熟心肌的细胞凋亡,而这种减少是否受缝隙连接蛋白43(Cx43)蛋白的表达和Cx43蛋白构成通道功能变化的影响。方法:通过高密度培养原代心肌细胞形成可见的细胞紧密连接,于缺氧复氧前短期加入不同浓度的T3(50ng/ml,1ng/ml,0.02ng/ml)及Cx43蛋白构成通道失耦联剂庚醇后通过流式细胞仪检测心肌细胞凋亡情况,并用Western blotting检测T3对Cx43的蛋白表达的调控,最后用划痕示踪法检测心肌细胞间缝隙连接功能变化的影响。结果:短期的各浓度T3干预均可减少心肌细胞的凋亡,而缝隙连接失耦联剂庚醇可减弱这种保护效应,T3可以上调Cx43的蛋白表达。短期给予各浓度T3对缝隙连接通信功能的无明显影响,而庚醇可以减弱缝隙连接的通信功能。结论:三碘甲状腺原氨酸对培养未成熟心肌细胞遭遇缺氧复氧凋亡具有保护作用,而其作用的机制不局限于细胞间的缝隙连接,而可能在与心肌细胞的线粒体Cx43蛋白构成通道变化有密切关系。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第1章 引言
  • 第2章 材料
  • 2.1 实验动物
  • 2.2 主要仪器设备
  • 2.3 主要试剂
  • 2.4 主要试剂的配制
  • 第3章 方法
  • 3.1 细胞实验分组
  • 3.2 原代心肌细胞的制备
  • 3.3 药物干预与缺氧复氧培养
  • 3.4 Westblotting 检测心肌细胞Cx43 蛋白水平的变化
  • 3.5 流式细胞仪检测心肌细胞凋亡
  • 3.6 划痕标记/染料示踪技术检测心肌细胞间 GJIC 功能
  • 3.7 数据处理
  • 第4章 结果
  • 4.1 药物对心肌细胞搏动频率的影响
  • 4.2 药物对缺氧复氧后 Cx43 蛋白表达的影响
  • 4.3 药物对缺氧复氧后心肌细胞凋亡的影响
  • 4.4 药物对心肌细胞间 GJIC 功能的影响
  • 第5章 讨论
  • 5.1 甲状腺素与心肌细胞的功能
  • 5.2 心肌细胞死亡方式与缝隙连接 GJIC 功能
  • 5.3 线粒体的 Cx43 蛋白和心肌细胞凋亡
  • 5.4 未来研究与临床价值
  • 第6章 结论
  • 致谢
  • 参考文献
  • 综述 缺血后处理研究新进展
  • 攻读学位期间的研究成果
  • 相关论文文献

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