论文摘要
DNA回旋酶是细菌所特有的一种拓扑异构酶,该酶由两个A亚基和两个B亚基聚合而成。A、B亚基分别有各自的功能区,共同决定该酶的生物学功能。它能够利用ATP的能量将共价闭合环状DNA（cccDNA）转变为负超螺旋DNA,从而维持细菌体内正常的超螺旋水平。筛选结核杆菌回旋酶抑制剂有可能获得新型抗结核药物。本课题组应用细胞水平的以DNA回旋酶B亚基为靶点的抗结核药物筛选模型,筛选得到了25个阳性菌株,本研究对这些菌株进行了再筛选,对活性稳定的阳性菌株I03A-09005和I03A-00463进行深入研究。菌株I03A-09005的发酵液经大孔树脂柱层析,硅胶柱,HPLC分离得到了单一组分的活性化合物9005B,该化合物对H37Rv的MIC为64～128 ug/ml,并经过质谱、碳谱、氢谱等进行结构确证研究,鉴定9005B为放线菌素X2。菌株I03A-00463的发酵液经大孔树脂柱层析,ODS柱层析,得到纯度约为28.15%的阳性化合物03-0463。同时,采用分子生物学方法构建了含有结核杆菌H37Rv gyrB基因的表达质粒pET-19b/gyrB,转化至BL21（λDE3）pLysS中,利用原核表达系统成功克隆表达了结核杆菌H37Rv的DNA回旋酶B亚基,为建立分子水平得以DNA回旋酶B亚基为靶点的抗结核药物筛选模型奠定了基础。
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