宽叶缬草黄酮类物质研究

论文摘要

缬草（Valeriana.officinalis L）,系败酱科多年生草本植物,其根和根茎可入药。缬草具有镇静、安眠、抗惊厥及抗菌、抗病毒、抗肿瘤等药理作用,缬草主要含环烯醚萜、倍半萜、生物碱和黄酮四大类型化学成分,其中环烯醚萜、倍半萜的研究较为系统全面,而缬草黄酮还未见深入研究。黄酮类化合物作为植物体内非常重要的一类次生代谢产物,其具有抗癌抗肿瘤、抗氧化抗自由基、抗心脑血管疾病、抗菌和抗病毒及保护神经系统等多种生物学活性,是降血脂、治疗心血管疾病、清除体内自由基等药物的有效成分,是一类具有广阔开发前景的天然药物,而黄酮类有效成分的分离提取又是其研发和应用的关键。到目前为止,缬草属中最具重要价值之一的宽叶缬草叶（V.officinalis L.Var.Latifolia Miq）黄酮类物质研究未见报道。为了充分利用资源,走综合开发科学合理利用资源的道路,本研究对宽叶缬草叶、愈伤组织黄酮的提取、分离、纯化及成分进行了较系统研究,主要结果如下:1.建立以芦丁为标准品的亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法测定宽叶缬草总黄酮含量。比较研究了三氯化铝和亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法测定宽叶缬草中总黄酮含量;进行野生与人工栽培宽叶缬草总黄酮及缬草叶中总黄酮含量差异的研究;对比研究超声波提取和乙醇回流提取总黄酮得率。综合比较分析最后确立最优提取和测定方法为:以乙醇回流提取总黄酮,用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色体系,在510nm波长下测定宽叶缬草总黄酮。2.采用L9（34）正交优化提取试验,方差分析结果表明,各因素对宽叶缬草黄酮提取效果的影响程度从高到低依次为:乙醇浓度＞提取温度＞料液比＞提取时间。故选择最佳的提取工艺参数为:乙醇浓度为40%,提取时间为120min,提取温度为80℃,料液比为1:30。3.通过对五种不同性质的树脂进行静态吸附效果比较,数据表明AB-8型大孔树脂和聚酰胺吸附树脂对缬草黄酮均有较好的吸附及解吸效果,但聚酰胺的吸附率较AB-8大孔树脂要高,综合比较最后选用聚酰胺对宽叶缬草提取物进行分离纯化,从中得到1个纯度较高的未知化合物。4.采用紫外扫描、高效薄层分离、反相高效液相色谱三结合,鉴别宽叶缬草中主要黄酮成分。反相高效液相色谱测定采用Kromasil C18 5μm（4.6mm id×250mm）色谱柱,以甲醇-0.2%冰醋酸为流动相,进行梯度洗脱,紫外检测波长为330nm,流速为1mL/min.柱温35℃。通过数据分析,初步判定宽叶缬草叶中存在有芦丁、槲皮素、山奈酚、芹菜素等黄酮类物质。该方法简便、快速、准确,可用于黄酮类物质的定性定量检测。5.通过比较不同生长期及营养部位总黄酮含量,宽叶缬草离体培养诱导的愈伤组织总黄酮含量比叶外植体总黄酮含量要低,但为用细胞工程技术研究缬草的次生代谢产物提供了方向。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.研究目的和意义
• 2.国内外缬草研究的现状和趋势
• 2.1 植物学研究
• 2.2 主要功能成分研究
• 2.2.1 黄酮类
• 2.2.2 倍半萜类挥发油类
• 2.2.3 环烯醚萜类
• 2.2.4 木脂素类
• 2.2.5 其他成分
• 2.3 药理作用
• 2.3.1 镇静催眠作用
• 2.3.2 心脑血管的药理作用
• 2.3.3 其它药理作用
• 2.4 繁殖开发利用
• 3.国内外黄酮类化合研究进展
• 3.1 黄酮类化合物主要开发应用内容
• 3.2 黄酮类化合物的提取分离
• 3.2.1.传统提取技术
• 3.2.2.现代提取技术
• 3.3.黄酮类化合物的分离纯化技术
• 3.3.1.柱层析法
• 3.3.2.高效液相色谱法
• 3.3.3.高速逆流色谱法
• 3.4 黄酮类活性成分分析鉴定
• 3.4.1 分光光度法
• 3.4.2.色谱分析法
• 4.本课题主要研究的内容
• 4.1 宽叶缬草叶总黄酮提取与测定方法的建立及叶愈伤组织总黄酮的测定
• 4.2 宽叶缬草叶黄酮类物质的提取工艺优化
• 4.3 宽叶缬草叶黄酮类物质的分离纯化
• 4.4 宽叶缬草叶黄酮类化合物成分分析
• 第二章 宽叶缬草总黄酮提取与检测方法研究
• 1 实验材料与仪器
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验仪器
• 1.3 实验试剂
• 2 实验方法
• 2.1 黄酮类化合物理化检识反应
• 2.2 总黄酮测定
• 2.2.1 检测波长的选择
• 2.2.2 芦丁标准液的制备
• 2.2.3 样品制备
• 2.2.4 芦丁标准曲线
• 2.2.5 不同检测方法测定样品中总黄酮
• 2.3 亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠法方法准确性评价
• 2.3.1 精密度实验
• 2.3.2 显色稳定性实验
• 2.3.3 重现性试验
• 2.3.4 加标回收实验
• 2.4 不同提取方法比较
• 2.4.1 回流提取
• 2.4.2 超声波提取
• 2.5 不同生长时期、营养部位总黄酮含量比较
• 2.6 愈伤组织总黄酮测定
• 3.结果与分析
• 3.1 黄酮化合物特征反应检识
• 3.2 检测波长的确定
• 3.2.1 亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠法
• 3.2.2 三氯化铝显色法
• 3.3 芦丁标准曲线的制作
• 3.3.1 亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠法
• 3.3.2 三氯化铝法
• 3.4 检测方法准确性评价
• 3.4.1 精密性实验
• 3.4.2 显色液的稳定性
• 3.4.3 重现性试验
• 3.4.4 加标准回收实验
• 3.5 不同提取与检测方法比较
• 3.6 不同生长时期、部位含量的测定结果
• 3.7 愈伤组织总黄酮测定结果
• 3.7.1 芦丁标准曲线
• 3.7.2 样品总黄酮测定
• 4.小结与讨论
• 第三章 缬草黄酮类化合的提取分离纯化
• 1.实验材料与仪器
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验仪器
• 1.3 实验试剂
• 2.实验方法
• 2.1 乙醇回流提取宽叶缬草中总黄酮工艺优化
• 2.1.1 单因素实验
• 2.1.2 正交试验与设计
• 2.2 宽叶缬草黄酮吸附树脂分离纯化工艺研究
• 2.2.1 树脂的预处理
• 2.2.2 树脂的筛选
• 2.2.3 装柱与上样
• 2.2.4 梯度洗脱
• 3.结果与分析
• 3.1 乙醇浓度对提取效果的影响
• 3.2 料液比对提取效果的影响
• 3.3 回流提取温度对提取效果的影响
• 3.4 回流提取时间对提取效果的影响
• 3.5 回流提取正交试验结果与分析
• 3.6 树脂吸附效果比较
• 3.7 梯度洗脱效果分析
• 4.小结与讨论
• 第四章 宽叶缬草黄酮类化合物成分分析
• 1.材料、仪器与试剂
• 1.1 材料
• 1.2 试验仪器
• 1.3 主要试剂
• 2.实验方法
• 2.1 黄酮体的检测
• 2.2 紫外光谱
• 2.3 高效薄层色谱分析
• 2.4 高效液相色谱分析
• 2.4.1 对照品溶液的制备
• 2.4.2 供试品溶液的制备
• 2.4.3 HPLC分析条件
• 3.结果与分析
• 3.1 黄酮体的特征反应检识
• 3.2 缬草黄酮粗提物的紫外光谱分析
• 3.3 缬草黄酮高效薄层层析分析
• 3.4 宽叶缬草黄酮粗提物的高效液相色谱分析
• 4.小结与讨论
• 全文结论
• 展望
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 作者简历