罗勒、玫瑰和香柠檬水提非挥发性组分抗氧化及对离体培养小牛主动脉内皮细胞和平滑肌细胞氧化损伤的保护功效研究

论文摘要

近年来,天然抗氧化剂取代人工合成抗氧化物质已成为国内外研究热点。其中,芳香植物提取物抗氧化作用深受关注,但关注焦点集中在芳香植物精油上,对芳香植物非精油组分清除自由基、抗氧化作用及对血管细胞氧化损伤的保护作用研究甚少,且主要集中于薰衣草、迷迭香等几种知名芳香植物。 本研究选取罗勒和香柠檬干燥叶片及玫瑰花水提非挥发性组分作为实验材料,采用七种生物化学发光法和两种分光光度法,较系统地检测了罗勒、玫瑰和香柠檬水提非挥发性组分（以下简称罗勒、玫瑰和香柠檬）消除活性氧（ROS）、活性氮（RNS）和活性碳（RNC）、抗脂质过氧化及对DNA损伤保护的作用。并以体外培养的小牛主动脉内皮细胞（EC）和血管平滑肌细胞（SMC）为实验材料检测罗勒、玫瑰和香柠檬对过氧化氢（H2O2）胁迫下的EC、SMC 内源性超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性,及对还原型谷胱苷肽（GSH）、丙二醛（MDA）和过氧亚硝基（ONOO）浓度的影响。 抗氧化实验结果表明:罗勒、玫瑰和香柠檬不但能直接清除超氧阴离子自由基（O2-）,而且能通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性而减少O2-的产生;罗勒、玫瑰和香柠檬也能有效消除羟自由基（·OH）、过氧化氢（H2O2）、二苯代苦味肼基自由基（DPPH·）、ONOO和碳酸自由基（（CO3-）-）。结果还显示,罗勒、玫瑰和香柠檬均能抑制脂质过氧化,明显的抑制和延缓DNA损伤,起到预防型抗氧化剂和断链型抗氧化剂的双重作用。 细胞学实验结果表明:罗勒、玫瑰和香柠檬均可促进EC的增殖而抑制SMC的增殖;也可剂量依赖性地提高H2O2胁迫下的EC和SMC内源性SOD、CAT活性及GSH水平,抑制细胞内外的ONOO-和MDA的产生。并可减少氧化胁迫下EC和SMC细胞凋亡的数目。提示罗勒、玫瑰和香柠檬具有保护心血管、防止心血管氧化损伤、防治动脉粥样硬化的作用,而且可能是通过提高抗氧化酶活性和清除ROS及RNS的双重作用而减轻或防止心血管氧化损伤。 本研究也检测了罗勒、玫瑰和香柠檬抗氧化的组分,发现三者都含有一定量的黄酮类和酚类物质,且发现三者抗氧化作用强弱顺序与其黄酮类化合物含量多少顺序相匹配,提示其黄酮类化合物是其抗氧化的主要有效成分之一。 由上可知,本研究是自由基生物学和植物资源学的交叉和渗透,所得结果对进一步开发芳香植物资源特别是拓展其医疗和营养保健等方面的功能具有重要的理论价值和应用前景。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 综述
• 1 实验仪器、材料及方法
• 1.1 罗勒、玫瑰和香柠檬清除自由基、抗氧化效率测定
• 2^-的化学发光体系'>1.1.1 产生O₂^-的化学发光体系
• -OH的化学发光体系'>1.1.2 产生^-OH的化学发光体系
• 2O₂的化学发光体系'>1.1.3 H₂O₂的化学发光体系
• 1.1.4 羟胺自氧化产生过氧亚硝基体系
• 2+诱发脂蛋白PUFA过氧化产生MDA体系'>1.1.5 Fe²⁺诱发脂蛋白PUFA过氧化产生MDA体系
• -）比色体系'>1.1.6 二苯代苦味肼基自由基（DPPH^-）比色体系
• 4-Phen-Vit．C-DNA-H₂O₂化学发光体系'>1.1.7 CuSO₄-Phen-Vit．C-DNA-H₂O₂化学发光体系
• 3^-化学发光体系的建立及其应用测定'>1.1.8 碳酸自由基CO₃^-化学发光体系的建立及其应用测定
• 1.1.9 全血吞噬细胞化学发光体系
• 1.1.10 还原力测定
• 1.1.11 亚铁离子鏊合能力测定
• 1.1.12 罗勒、玫瑰和香柠檬有效组分分析
• 1.2 罗勒、玫瑰和香柠檬对离体培养小牛主动脉内皮和平滑肌氧化损伤保护作用的测定
• 1.2.1 小牛主动脉内皮细胞（EC）及平滑肌细胞（SMC）培养
• 1.2.2 MTT法测定EC增殖率及SMC存活率
• 2O₂损伤细胞模型的建立'>1.2.3 H₂O₂损伤细胞模型的建立
• 1.2.4 实验分组
• 1.2.5 细胞裂解液的制备
• 1.2.6 考马斯亮蓝染色法测定细胞裂解液蛋白含量
• 1.2.7 过氧化氢酶（CAT）活力测定
• 1.2.8 超氧化物歧化酶（SOD）含量的测定
• 1.2.9 还原型谷胱甘肽（GSH）含量测定
• 1.2.10 丙二醛（MDA）含量的测定
• -）浓度的测定'>1.2.11 过氧亚硝基阴离子（ONOO^-）浓度的测定
• 1.2.12 流式细胞术检测EC和SMC凋亡
• 2 结果与分析
• 2.1 罗勒、玫瑰和香柠檬清除自由基、抗氧化效率
• 2^-的清除作用'>2.1.1 对O₂^-的清除作用
• 2.1.2 对OH的清除作用
• 2O₂的清除作用'>2.1.3 对H₂O₂的清除作用
• -的清除作用'>2.1.4 对ONOO^-的清除作用
• 2.1.5 抗脂质过氧化作用
• -的清除作用'>2.1.6 对DPPH^-的清除作用
• -OH引起的DNA损伤的保护作用'>2.1.7对^-OH引起的DNA损伤的保护作用
• 3^-的清除作用'>2.1.8对CO₃^-的清除作用
• 2.1.9 对全血吞噬细胞发光的影响
• 2.1.10 还原力
• 2.1.11 亚铁离子鏊合能力
• 2.1.12 罗勒、玫瑰和香柠檬有效组分分析
• 2.2 罗勒、玫瑰和香柠檬对离体培养小牛主动脉内皮和平滑肌氧化损伤的保护作用
• 2.2.1 细胞形态学鉴定
• 2.2.2 罗勒、玫瑰和香柠檬对EC和SMC增殖的影响
• 2O₂损伤的EC及SMC的保护作用'>2.2.3 罗勒、玫瑰和香柠檬对H₂O₂损伤的EC及SMC的保护作用
• 3 讨论
• 参考文献
• 发表及完成论文