全氟化碳汽化吸入对海水淹溺型呼吸窘迫综合症动物治疗作用及机制的实验研究

全氟化碳汽化吸入对海水淹溺型呼吸窘迫综合症动物治疗作用及机制的实验研究

论文摘要

目的通过制作海水淹溺型呼吸窘迫综合症(seawaterrespireatory distress syndrome,SW-RDS)动物模型,观察PFC汽化吸入对SW-RDS的治疗作用,同时从肺组织结构变化、肺泡表面张力、磷脂组分、表面蛋白SP-B,SP-C mRNA的表达和SP-B蛋白定量分析等层面探讨PFC汽化吸入治疗SW-RDS的作用机制。方法健康雌性新西兰兔43只(平均体重3.00±0.18kg),随机分为5组实验组,每组8只及空白组3只:①常规通气组(CMV组):Vt=8ml/kg,PEEP=0cmH2O,PFC=0ml/kg.h;②PFC汽化吸入组(PFC组):Vt=8ml/kg,PEEP=0cmH2O,PFC=7ml/kg.h;③呼气末正压组(PEEP组):Vt=8ml/kg,PEEP=8cmH2O,PFC=0ml/kg.h;④PFC汽化吸入+呼气末正压组(PEEP+PFC组):Vt=8ml/kg,PEEP=8cmH2O,PFC=7ml/kg.h;⑤对照组(C组):模型制作成功后,撤离呼吸机,记录自然死亡时间。前4组动物按照不同的实验分组进行相应的通气治疗2小时,后调整为基础参数继续观察4小时后处死。每组取6只动物游离并结扎右肺,左肺进行支气管肺泡灌洗,右肺进行肺组织病理观察及分子生物学指标检测。空白组3只直接处死,取右肺组织甲醛固定,观察正常肺组织结构。第一部分:观察SW-RDS兔在不同机械通气模式治疗2小时和后续4小时期间呼吸力学指标、血液动力学指标、气体交换指标的变化;观察光学显微镜下肺泡、肺泡间质的变化以及炎性细胞浸润情况;观察透射电镜下肺泡Ⅱ型上皮细胞以及细胞胞浆内板层体和线粒体的改变。第二部分:从表面活性物质方面探讨PFC汽化吸入治疗SW-RDS的作用机制。1、测定支气管肺泡灌洗液肺泡表面张力变化,进行表面活性物质功能的评价;2、应用实时荧光定量PCR技术从基因水平观察表面活性蛋白SP-B和SP-C mRNA的表达;3、应用免疫组化和Western blot技术观察SP-B在蛋白水平上的变化;4、应用高效液相方法测定肺组织磷脂组分的变化。结果1实验动物建立SW-RDS模型成功后呼吸力学指标(气道峰压、平台压、肺静态顺应性)明显恶化,氧合指数下降,应用CMV治疗上述指标无改善,肺组织损伤明显,肺泡Ⅱ型上皮细胞内板层体出现空泡化和排空现象,应用PEEP、PFC和PFC+PEEP治疗后,气体交换和呼吸力学指标均明显改善,肺组织损伤减轻,肺泡不同程度复张,板层体空泡化程度减轻。三组与CMV组比较呼吸力学指标与氧合指数差异均有统计学意义。此外,PFC汽化吸入对血流动力学指标(平均动脉压和心率)未产生不良影响。在停止PFC汽化后,氧合改善作用仍能维持一段时间。PFC汽化吸入与PEEP在联合治疗期间具有一定的叠加作用,但PEEP并不利于这种协同作用的维持。在停止治疗后,PFC+PEEP组氧合指数和肺顺应性在1小时内降到单纯PFC汽化吸入水平。C组动物在脱机15分钟内全部死亡。2 SW-RDS动物支气管肺泡灌洗液(bronchus alveolarlavage fluids,BALF)表面张力明显升高,应用PFC和PFC+PEEP治疗后,表面张力显著下降,二组与CMV组比较,差异均有统计学意义。PEEP组表面张力虽有下降趋势但与CMV组比较无统计学差异。3 PFC组、PEEP组和PFC+PEEP组SP-B、SP-C mRNA水平较CMV组升高,差异均有统计学意义。其中PFC+PEEP组升高最明显,与PEEP组基因表达水平比较也有统计学差异。免疫组化和蛋白免疫印迹证实PFC组和PFC+PEEP组肺泡Ⅱ型上皮细胞内SP-B表达较CMV组明显增强。4将表面张力和氧合指数与肺组织磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、SP-B mRNA、SP-C mRNA、SP-B蛋白含量进行相关分析后发现:表面张力与SP-B mRNA、SP-C mRNA表达水平呈明显负相关,氧合指数与磷脂酰胆碱、SP-B mRNA、SP-C mRNA呈明显正相关。提示表面活性蛋白与磷脂酰胆碱对表面活性物质功能和气体交换有重要的影响。结论1、PFC汽化吸入能明显改善SW-RDS动物的气体交换和呼吸力学指标,降低支气管肺泡灌洗液表面张力,促进肺泡复张,减轻肺组织损伤,减少肺泡Ⅱ型上皮细胞内板层体表面活性物质的分泌。同时PFC汽化吸入和PEEP联合治疗在改善气体交换方面具有一定的协同效应。2、PFC汽化吸入对SW-RDS动物气体交换和呼吸力学改善作用以及后续效应可能与PFC汽化吸入促进了内源性表面活性物质合成有关。PFC汽化吸入增加了磷脂酰胆碱的含量,改变了肺组织中不同磷脂组分的比例,也促进了SP-B、SP-C mRNA表达,增加了肺组织中SP-B含量,使表面活性物质中具有生物学活性的大聚体比例增加,气体交换和肺顺应性得到改善。

论文目录

  • 英文缩写词表
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 前言
  • 全氟化碳汽化吸入对海水淹溺型呼吸窘迫综合症动物治疗效果及机制研究
  • 第一部分 全氟化碳汽化吸入治疗海水淹溺型呼吸窘迫综合症兔的实验研究
  • 材料和方法
  • 结果
  • 一、呼吸力学指标
  • 二、气体交换指标
  • 三、血流动力学指标
  • 四、肺组织形态学改变
  • 1 光学显微镜下肺病理损伤评分
  • 2 光学显微镜下肺组织结构改变
  • 3 透射电镜下肺组织结构改变
  • 讨论
  • 参考文献
  • 第二部分 全氟化碳汽化吸入改善海水淹溺型呼吸窘迫综合症兔氧合作用的机制研究
  • 第一节 全氟化碳汽化吸入对海水淹溺型呼吸窘迫综合症兔表面活性物质生物学功能的的影响
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 第二节 全氟化碳汽化吸入对海水淹溺型呼吸窘迫综合症兔肺表面活性物质结构的影响
  • 2.1 高效液相色谱分析全氟化碳汽化吸入对海水淹溺型呼吸窘迫综合症兔肺组织磷脂组分的影响
  • 材料和方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 2.2 全氟化碳汽化吸入对海水淹溺型呼吸窘迫综合症兔肺组织SP-B SP-C的影响
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 结论
  • 文献综述一 液体通气治疗ALI/ARDS临床研究现状
  • 文献综述二 肺表面活性物质与肺损伤
  • 攻读学位期间发表的论文
  • 致谢
  • 相关论文文献

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