论文摘要
本研究通过鸡胚尿囊腔接种,繁殖H5亚型禽流感病毒,将收获的尿囊液用0.1%甲醛灭活。用差速离心和凝胶过滤方法纯化病毒后免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,融合率达到99.1%。用血凝抑制试验（HI）进行筛选,选择其中3个较优阳性孔,采用有限稀释法对其进行克隆,经过三次克隆,最后获得两株能稳定分泌抗禽流感H5亚型血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2G4和3D7。 用秋水仙碱诱导法进行染色体分析,证明2G4和3D7两株杂交瘤细胞染色体数分别为96条和98条。琼脂免疫双向双扩散法鉴定表明,2G4和3D7两株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体都为IgG1亚类。2G4和3D7两株单抗细胞上清HI价分别为1:27和1:29;腹水HI价分别为1:211和1:212。两株杂交瘤细胞均能稳定分泌抗禽流感H5亚型血凝素单克隆抗体而且与NDV、H7、H9、EDSV无交叉反应。中和实验表明所获得的两株单抗都具有较好的中和活性。 连续传25代,及冻存3个月复苏,两株细胞均能稳定分泌抗禽流感H5亚型血凝素抗体,说明两株杂交瘤细胞均具有良好的稳定性。
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