蜘蛛香总黄酮的提取纯化及抗肿瘤作用研究

论文摘要

目的：研究败酱科（Valerianaceae）缬草属（Valeriana Linn）植物蜘蛛香（Valeriana jatamansi Jones）黄酮类化合物的提取纯化工艺及抗肿瘤作用。方法：采用超声波提取法,以总黄酮为指标,通过单因素实验和正交实验筛选蜘蛛香总黄酮提取的最佳工艺。进一步利用大孔树脂纯化总黄酮,采用静态吸附-解吸方法,以吸附量和解吸率为指标,筛选最佳树脂并对该树脂的动态吸附和洗脱条件进行单因素实验研究,得到了较好的蜘蛛香总黄酮纯化工艺。采用小鼠H22肝癌、S180纤维肉瘤模型,观察蜘蛛香总黄酮的抗肿瘤药效作用。结果：以总黄酮为指标,经单因素实验和正交实验筛选,确定蜘蛛香超声提取最佳工艺为20倍量65%乙醇、提取20分钟、提取3次。采用大孔树脂纯化总黄酮。采用静态吸附-解吸方法,以吸附量和解吸率为指标,筛选最佳树脂为HPD600；对HPD600大孔树脂的动态吸附和洗脱条件进行单因素实验研究,得到了较好的纯化方法：最佳动态吸附、洗脱条件为蜘蛛香总黄酮提取液质量浓度3.42mg·mL-1,吸附流速2.4BV·h-1,上样量25.64mg·g-1干树脂；吸附后的树脂柱先以3BV水洗脱,再用4BV80%乙醇以2.4BV·h1流速洗脱,总黄酮质量分数为41.20%,收率为80.36%。药效学实验结果表明,蜘蛛香总黄酮对肿瘤生长有抑制作用。对H22肿瘤生长的抑制作用：蜘蛛香总黄酮高、中、低剂量组和替加氟组的抑瘤率分别为：19.25%、30.06%、25.97%及45.32%,且与模型组的平均瘤重相比,蜘蛛香总黄酮中、低剂量组有显著差异（p<0.05）,替加氟组具有极显著性差异（p<0.01）。对S180肿瘤生长的抑制作用：蜘蛛香总黄酮高、中、低剂量组和替加氟组的抑瘤率分别为：30.80%、41.53%、45.57%及59.97%,且与模型组的平均瘤重相比,蜘蛛香总黄酮高、中、低剂量组有显著差异（p<0.05）,替加氟组具有极显著性差异（p<0.01）。对H22和S180荷瘤小鼠的免疫器官胸腺初步观察表明,与正常组胸腺指数相比,两种荷瘤小鼠模型组有下降趋势但无差异；替加氟组降低,且具有极显著性差异（p<0.01）；蜘蛛香总黄酮给药组与正常组无明显差别。与模型组胸腺指数相比,蜘蛛香总黄酮给药组有升高趋势,其中H22中、低剂量组具有显著差异（p<0.05）。病理形态学观察表明,两种荷瘤小鼠模型组均出现肿瘤细胞数量多而密集,形态异型性明显,细胞核大。替加氟组和蜘蛛香总黄酮给药各组出现不同程度的细胞坏死现象。结论：经单因素实验和正交实验筛选,蜘蛛香超声提取最佳工艺为20倍量65%乙醇、提取20分钟、提取3次。经单因素实验优选,蜘蛛香总黄酮的最佳纯化工艺为：HPD600大孔树脂、上样浓度3.42mg·mL-1,吸附流速2.4BV·h-1,上样量25.64mg·g-1干树脂；吸附后的树脂柱先以3BV水洗脱,再用4BV80%乙醇以2.4BY·h-1流速洗脱。药效学实验表明,蜘蛛香总黄酮对接种H22肝癌和S180纤维肉瘤的小鼠有明显抗肿瘤作用,其中,以低剂量和中剂量为佳。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 课题来源
• 1.2 本课题的特色与创新
• 1.2.1 工艺创新
• 1.2.2 应用创新
• 1.3 黄酮类化合物研究进展
• 1.3.1 黄酮类化合物的种类
• 1.3.2 黄酮类化合物的提取方法
• 1.3.3 黄酮类化合物的分离纯化方法
• 1.3.4 黄酮类化合物的含量测定方法
• 1.3.5 黄酮类化合物的抗肿瘤作用
• 1.4 蜘蛛香研究进展
• 1.4.1 化学成分研究
• 1.4.2 药理活性研究
• 第2章 蜘蛛香总黄酮含量的测定
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验仪器
• 2.1.2 实验试剂及药品
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 标准品和样品溶液的制备
• 2.2.2 测定波长的选择
• 2.2.3 标准曲线的制定
• 2.2.4 精密度实验
• 2.2.5 重复性实验
• 2.2.6 稳定性实验
• 2.2.7 加样回收率实验
• 2.2.8 样品总黄酮含量的测定
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 测定波长的选择
• 2.3.2 标准曲线的制定
• 2.3.3 精密度实验
• 2.3.4 重复性实验
• 2.3.5 稳定性实验
• 2.3.6 加样回收率实验
• 2.4 小结与讨论
• 第3章 蜘蛛香总黄酮的提取工艺研究
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 实验仪器
• 3.1.2 实验试剂及药品
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 提取溶剂的选择
• 3.2.2 乙醇浓度对总黄酮提取率的影响
• 3.2.3 不同料液比对总黄酮提取率的影响
• 3.2.4 不同提取时间对总黄酮提取率的影响
• 3.2.5 提取次数对总黄酮提取率的影响
• 3.2.6 不同浸泡时间对总黄酮提取率的影响
• 3.2.7 正交实验设计
• 3.2.8 正交实验数据处理
• 3.2.9 最佳工艺条件的稳定性验证实验
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 提取溶剂的选择
• 3.3.2 乙醇浓度对总黄酮提取率的影响
• 3.3.3 不同料液比对总黄酮提取率的影响
• 3.3.4 不同提取时间对总黄酮提取率的影响
• 3.3.5 提取次数对总黄酮提取率的影响
• 3.3.6 不同浸泡时间对总黄酮提取率的影响
• 3.3.7 正交实验结果与分析
• 3.3.8 最佳工艺条件的稳定性实验结果
• 3.4 小结与讨论
• 第4章 蜘蛛香总黄酮的纯化工艺研究
• 4.1 实验材料
• 4.1.1 实验仪器
• 4.1.2 实验试剂及药品
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 树脂的预处理
• 4.2.2 装柱
• 4.2.3 样品的制备
• 4.2.4 大孔树脂型号的选择
• 4.2.5 HPD600大孔树脂对蜘蛛香总黄酮的纯化工艺研究
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 大孔树脂型号的选择
• 4.3.2 HPD600大孔树脂对蜘蛛香总黄酮的纯化工艺研究
• 4.4 小结与讨论
• 第5章 蜘蛛香总黄酮的抗肿瘤作用
• 5.1 实验材料
• 5.1.1 实验仪器
• 5.1.2 动物及瘤株
• 5.1.3 实验试剂及药品
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 药物制备
• 5.2.2 瘤株接种
• 5.2.3 动物分组及给药方法
• 5.2.4 指标检测
• 5.2.5 数据处理与统计方法
• 5.3 结果与分析
• 5.3.1 荷瘤小鼠的一般情况
• 5.3.2 蜘蛛香总黄酮对荷瘤小鼠生长的影响
• 5.3.3 对小鼠免疫器官指数的影响
• 5.3.4 病理形态学观察
• 5.4 小结与讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的论文及参加的科研课题