论文摘要
目的：研究0.05 Gy-10 Gy剂量范围电离辐射对PIG3基因mRNA表达的影响规律，探索建立一种新型生物剂量计的可能性；探讨电离辐射对PIG3基因表达的调控机制及生物学意义；了解不同肿瘤组织中PIG3基因的表达变化。方法：0.05、0.5、2、4、6、8、和10 Gy 60Coγ射线照射人淋巴母细胞AHH-1后4h，应用荧光实时定量PCR技术对PIG3基因mRNA表达水平进行相对定量分析，并用Northern blot进一步验证；Northern blot检测不同刺激因素对PIG3表达的影响；应用荧光报告基因分析和鉴定启动子活性；应用肿瘤谱阵列芯片对不同肿瘤组织及正常组织中PIG3基因的表达进行检测。结果：1)利用荧光实时定量PCR技术对PIG3基因辐射诱导表达的剂量效应规律进行了分析，结果表明，PIG3 mRNA表达水平具有显著剂量依赖性，在至少0.5～10Gy范围内，表达丰度随照射剂量的升高而上调，且4Gy照射后48h，PIG3基因的辐射诱导表达仍未见明显降低；2)Northern blot检测结果显示，电离辐射和过氧化氢对A549细胞中PIG3基因的表达均有诱导作用，而顺铂对A549细胞中PIG3基因mRNA表达水平无明显影响。与对照的人宫颈癌C33A-C（627）细胞相比，转染HPV E6蛋白的C33A-E6（673）细胞中p53蛋白水平显著降低、PIG3基因mRNA表达水平极低。3)构建了PIG3基因启动子的一系列突变体载体，通过牵引荧光报告基因表达分析，表明了辐射诱导PIG3基因表达可能主要由其中的微卫星序列介导；4)构建重组原核表达质粒pGEX-5T-PIG3，以谷胱甘肽琼脂糖亲和层析法，获得纯化的重组融合蛋白GST-PIG3，为功能研究奠定了基础；5)初步观察显示，与癌旁组织相比，肾癌细胞中PIG3基因表达显著下降。结论：发现了电离辐射对PIG3基因的诱导表达作用，揭示了该基因的辐射诱导表达具有良好的剂量效应关系，为进一步研究辐射生物学效应的分子机制、发展为新型生物剂量计奠定了基础。