中国汉族人群急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的遗传易感性研究

论文摘要

第一部分TIRAP基因多态性与脓毒症致ALI/ARDS易感性关联研究[目的]TIRAP基因编码的衔接蛋白-Mal是Toll样受体（TLRs）信号传导通路的重要衔接蛋白,在信号传导通路中具有重要的作用。有研究发现TLRs信号传导通路介导的炎症介质过量生成参与了ALI/ARDS的发病。最近研究发现TIRAP基因变异与多种炎症相关性疾病的易感性相关。本研究探讨TIRAP基因变异是否与中国汉族人群脓毒症致ALI/ARDS的发病相关。[方法]临床上收集278例脓毒症致ALI/ARDS患者、288例单独脓毒症患者和298例健康对照个体,利用中国汉族人群Hapmap数据库选择TIRAP基因的3个tag SNPs （rs595209, rs3802813和rs8177375）和2个文献报道的与炎症相关性疾病易感性相关的SNPs （rs8177374和rs7932766）进行研究；运用PCR直接测序的方法进行SNPs分型,基因型频率和等位基因频率在各组之间的比较采用χ2检验,运用Bonferroni方法进行校正和Logistic回归分析去除混杂因素的影响。[结果]研究发现TIRAP基因的5个SNPs等位基因频率分布在研究样本中均符合Hardy-Weinberg平衡,5个SNPs之间的连锁不平衡程度较弱。位于基因3’端区域的rs8177375和内含子区域的rs595209与中国汉族人群ALI/ARDS的易感性有关。ALI/ARDS患者rs8177375等位基因G的频率明显高于单独脓毒症组（p=0.00079）和正常对照组（p=0.0001）,基因型频率相比也具有显著性的统计学差异,携带等位基因G的个体更易患ALI/ARDS; ALI/ARDS患者rs595209A的等位基因频率也显著高于单独脓毒症组（p=0.0041）和正常对照组（p=0.0027）,携带等位基因A的个体更易患ALI/ARDS,基因型频率也存在显著性差异。rs8177375（C/A）和rs595209（A/G）组成的单倍型也与ALI/ARDS的易感性有关,与单个SNP相比差异更显著。ALI/ARDS患者组单倍型AG（rs595209A/rs8177375G）频率高于单独脓毒症组（OR=2.24,95%CI 1.52-3.29,p=0.00003）和正常对照个体（OR=2.13,95%CI 1.46-3.09,p=0.00006）。携带单倍型CA的个体不易患ALl/ARDS。运用Bonferroni方法进行校正和Logistic回归分析去除混杂因素后以上差异仍具有统计学意义。[结论]TIRAP基因多态性与中国汉族人群脓毒症致ALI/ARDS的易感性显著相关。第二部分TLRs信号传导通路相关基因多态性与ALI/ARDS易感性关联研究[目的]TLRs信号通路的过度激活和负性调节因子的功能失调均可引起炎症介质的过量生成,导致组织和器官的损伤,在ALI/ARDS的发病机制中具有重要的作用。本部分研究选择TLRs信号传导通路及负性调节因子的部分基因IRAK1, TRAF6、SIGIRR和IRAK3进行研究,探讨以上基因SNPs与中国汉族人群ALI/ARDS遗传易感的关联性。[方法]临床上收集336例ALI/ARDS患者和384名对照患者（入住ICU,具有ALI/ARDS发病的高危因素,而未进展至ALI/ARDS）入选本部分研究。根据Hapmap数据库共选择IRAK、TRAF6、SIGIRR和IRAK3基因的17个tag SNPs,利用SNPstream技术平台对17个SNPs进行分型。基因型频率和等位基因频率在各组之间的比较采用χ2检验,运用Bonferroni方法进行校正检验和Logistic回归分析去除混杂因素的影响。[结果]4个基因的17个SNPs成功分型,且所有的SNPs等位基因分布在研究样本中均符合HWE。研究发现：①TRAF6基因rs4755453的等位基因频率和基因型频率在ALI/ARDS组和对照组之间存在显著的统计学差异（p= 0.0000187, p= 0.00015）。ALI/ARDS患者rs4755453C的频率（10.7%）明显低于对照组（18.8%）,等位基因C对ALI/ARDS的患病具有保护作用（OR=0.52,95%CI0.38-0.70）; Logistic回归分析去除混杂因素后等位基因频率（p=0.000062,OR=0.61,95% CI 0.46-0.78）和基因型频率分布（p=0.00046）仍有显著性的统计学差异。Bonferroni校正后等位基因和基因型频率在两组之间仍存在显著性的统计学差异；②IRAK3基因rs1370128和rs2289314等位基因频率和基因型频率在对照组和ALI/ARDS疾病组之间也存在显著性的统计学差异,但运用Logistic去除混杂因素和Bonferroni校正后等位基因和基因型频率在两组之间无显著性差异（p>0.05）。Haplotype分析发现IRAK3基因10个SNPs组成2个单倍域共包括7种单倍型,2个单倍域与ALI/ARDS发病无明显的相关性；7种单倍型的分布频率在两组之间无显著的统计学差异；③IRAK1基因的1个tag SNP和SIGIRR基因的3个tag SNPs的等位基因和基因型频率分布在两组之间无显著的统计学差异。[结论]TRAF6基因多态性与中国汉族人群ALI/ARDS的遗传易感性相关。第三部分TNF-a信号传导通路相关基因多态性与ALI/ARDS易感性关联研究[目的]TNF-α是一种多效应的细胞因子,具有极强的促炎性反应以及免疫调节功能,是炎症反应的核心环节,已有大量的研究证实TNF-α在ALI/ARDS发病机制中具有重要的作用。TNF-α主要通过细胞膜上的受体（TNF receptor, TNFR）发挥生物学效应。A20是TNF-α信号传导通路的负反馈调节因子,是防止体内炎症反应失控的重要调节蛋白。本研究选择TNF-α、TNFRSFIA、TNFRSF1B和TNFAIP3作为候选基因,探讨以上基因的SNPs与中国汉族人群ALI/ARDS遗传易感的相关性。[方法]临床上收集336例ALI/ARDS患者和384名对照患者（入住ICU,具有ALI/ARDS发病的高危因素,而未进展至ALI/ARDS）入选本部分研究。共选择TNF-a、TNFRSF1A、TNFRSF1B和TNFAIP3基因的14个SNPs进行研究,利用PCR-直接测序法和SNPstream技术平台对14个SNPs进行分型。基因型频率和等位基因频率在各组之间的比较采用χ2检验,运用Bonferroni方法进行校正和Logistic回归分析去除混杂因素影响。[结果]14个SNPs的等位基因分布在研究样本中均符合HWE。研究发现：①TNFAIP3基因rs661561等位基因频率在ALI/ARDS组和对照组之间存在着显著的统计学差异（p=0.0002）,等位基因T频率在ALI/ARDS组为7.5%,明显低于对照组的频率13.6%,等位基因T对ALI/ARDS的发病具有保护作用（OR=0.52,95%CI0.36-0.74）。rs661561基因型GG、GT和TT的频率在两组之间也存在着显著的统计学差异（p=0.001）。Logistic回归分析去除混杂因素后rs661561等位基因频率（p=0.00052,OR=0.56,95%CI0.46-0.81）和基因型频率分布（p=0.0016）在两组之间的差异仍有显著性的统计学意义。Bonferroni校正后等位基因和基因型频率在两组之间仍存在显著性的统计学差异。Haplotype分析发现由2个SNPs（rs661561和rs610604）组成的单倍域与ALI/ARDS的发病明显相关,单倍型GT的频率在两组之间存在着显著的统计学差异（p=0.00039,OR=1.87,95% CI 1.32-2.65）, ALI/ARDS患者单倍型GT的频率（92.2%）明显高于对照组（86.3%）,携带GT的个体易患ALI/ARDS;单倍型TG的频率在两组之间也存在显著的统计学差异（p=0.029,OR=0.63,95%CI0.42-0.96）,携带单倍型TG个体不易患ALI/ARDS, Logistic回归分析后仍具有显著性的统计学差异；②TNF-α基因的4个SNPs、TNFRSF1A基因的2个SNPs以及TNFRSF1B基因的2个SNPs等位基因频率和基因型频率两组相比无显著的统计学差异。[结论]编码TNF-a信号传导通路的负性调节因子A20蛋白的-TNFAIP3基因变异与中国汉族人群ALI/ARDS的遗传易感性相关。

论文目录

• 英文缩略语注释
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 参考文献
• 第一部分 TIRAP基因多态性与脓毒症致ALI/ARDS易感性的关联研究
• 研究背景和目的
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 TLRs信号通路及负性调节因子基因多态性与ALI/ARDS易感性的关联研究
• 研究背景和目的
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第三部分 TNF-α信号传导通路关键基因多态性与ALI/ARDS易感性关联研究
• 研究背景和目的
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 全文小结
• 综述
• 参考文献
• 攻读博士期间发表论文和申请课题情况
• 致谢