论文摘要
目的子痫前期是妊娠期特有的疾病，严重影响母儿健康，以高血压、水肿、蛋白尿为主要临床表现，以全身小动脉痉挛为主要病理特点。探明本病病因及作用机制，是当代围产医学领域的重大课题。有关子痫前期的病因学说有免疫机制，胎盘浅着床，血管内皮细胞功能失调、遗传因素等，目前普遍认为胎盘浅着床和血管重铸障碍是子痫前期发生的病理基础。Lox-1（Lectin-like OX-LDL receptor 1），即氧化低密度脂蛋白的内皮受体，是清道夫受体（Scavenger Receptor：SR）家族的一种，Lox-1主要表达于血管内皮细胞及血管丰富的组织，如肺和胎盘。oxLDL，肿瘤坏死因子-α、血管紧张素Ⅱ、内皮素-1、白细胞介素-6，氧化应激产物等因素都上调了Lox-1的表达。病理条件下，Lox-1介导OX-LDL引起血管内皮损伤及功能失调，参与泡沫细胞形成，促进血管平滑肌细胞增殖及诱导凋亡等。国外有报导检测了先兆子痫和正常胎盘Lox-1的表达及滋养层细胞的凋亡情况，发现先兆子痫胎盘合体滋养细胞Lox-1的表达和滋养细胞凋亡，明显多于正常胎盘组织。国内未见此方面的研究，在轻度子痫前期与重度子痫前期Lox-1表达是否有差异，国内外尚未见报导。本研究应用免疫组织化学，免疫印迹（western blot）和半定量RT-PCR方法，检测并比较Lox-1在正常胎盘和子痫前期（轻度、重度）胎盘中的表达，探讨其在子痫前期发病中可能的作用及与子痫前期病情轻重的关系。方法一、研究对象2006年1月至2006年6月在中国医科大学第二临床医院妇产科经产妇及家属同意获得子痫前期患者胎盘40例，其中轻度子痫前期20例，重度子痫前期20例，子痫前期诊断标准为：单胎妊娠、无妊娠其它合饼症及饼发症，诊断和分类标准参照《妇产科学》（第六版）；选择同期正常妊娠胎盘20例，60例孕妇均为剖宫产。二、标本采集60例胎盘组织标本均手术时立即取材。标本一部分经多聚甲醛固定，常规脱水、包埋，以供免疫组织化学检查。其余新鲜部分置液氮冷冻后，送-80℃深冻冰箱保存。三、实验方法（一）免疫组织化学方法检测正常妊娠与子痫前期胎盘中Lox-1的表达石蜡切片常规脱蜡、水化。3％H2O2室温孵育10min，再对组织切片进行微波预处理，然后按SABC试剂说明书进行实验。（二）逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测LOX-1mRNA的表达组织总RNA提取，计算浓度与纯度。将mRNA逆转录合成CDNA后行PCR反应，按试剂盒说明书进行实验。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳，成像，分析。以B-actin同扩作内参照。（三）免疫印迹检测Lox-1的蛋白表达将胎盘标本经蛋白裂解液裂解，蛋白定量。提取的蛋白质样品经变性、电泳、转膜及封闭后，加入一抗孵育4℃过夜，加入二抗（碱性磷酸酶标记兔抗山羊IgG），摇床上室温杂交2h。碱性磷酸酶显色。凝胶成像分析，然后进行灰度值测定。四、统计学方法三组RT-PCR相对灰度值差异及Western-blot灰度值差异比较采用，两两之间配对t检验，每一统计学比较均以双侧P＜0.05为差异有统计学意义。结果一、Lox-1免疫组织化学染色结果Lox-1表达阳性的组织切片高倍镜下为棕黄色颗粒状，位于合体滋养细胞、细胞滋养细胞、血管内皮细胞。所有切片，均可见Lox-1免疫组化染色，但重度子痫前期Lox-1表达呈现阳性的细胞多，并反应强度强；轻度子痫前期次之；最弱为正常胎盘组织。二、Lox-1免疫印迹（western blot）和半定量RT-PCR方法检测结果从正常胎盘、轻度子痫前期胎盘到重度子痫前期胎盘均可见Lox-1mRNA和蛋白表达且呈增高趋势。三组间两两比较差异均有显著性的统计学意义（p＜0.01）。结论Lox-1在正常胎盘组织，轻度子痫前期胎盘组织，重度子痫前期胎盘组织均有表达且呈升高趋势，三者比较差异有统计学意义。提示Lox-1可能参与了子痫前期血管内皮损伤及胎盘缺血、缺氧的发病机理，且与病情有关。Lox-1可能成为衡量子痫前期进展的指标之一。